עיבוד Downstream של ביולוגים הוא הרצף הקריטי של טיהור ונוסחאות שהופכות את נוזל התרבות התאי קציר לתוך מוצר בטוח, חזק, טיפול יציב.למרות עיצוב קפדני וביצוע, המורכבות של פעולות אלה מציגה הזדמנויות רבות עבור סטיות תהליך. אובדן מוצר, זיהום נוגדנים, וכשלים איכותיים יכולים להוביל לדחיית דחייה יקרה, עיכובים רגולטוריים, ומחסורים שיטתי של הבנה משותפת של בעיות זרםיות, טיפוליות, טיפוליות חיוניות, שמירה על בעיות ביוסטרולטיביות, וגמישות, עמידה, עמידה על יעילות, ואפקטיביות, טיפוליות.

חלבון טרום-התחסין ו- Aggregation

משקעים חלבונים ואגורגציה הם בין הנושאים הנפוצים ביותר בעיבוד במורד הזרם.הם באים לידי ביטוי כטרפוחיות גלויה, חלקיקים תת-קרקעיים מוגברים, או ירידה בהחלמה בצעדים chromatography. תופעות אלה נובעות מלחצים פיזיים או כימיים אשר משבשים את החלבון הילידים, המוביל לאינטראקציות הידרופוביות, לנטרל, או לקשור קשר בין-קשר בין-קשר בין-קשר.

גורמים וגורמים מתקדמים

גורמים נפוצים כוללים סיורים חדים pH, תנודות טמפרטורה, כוחות עתירי גבוה במהלך המשאבה או ערבוב, וחשיפה ממושכת סוכנים כאוטרופיים או פותרים אורגניים. יכולת buffer במהלך עומס או מדרגות השקיה יכול לגרום שינויים pH מקומיים כי עולה על יציבות של חלבון.בנוסף, ריכוז גבוה, במיוחד ליד נקודת האנדרוגי, מקדם דיסוציאציה עצמית ומשקעים.

פתרון בעיות ומייגציה

  • (FLT:0) ,Optimize תנאי buffer: ibph:1 , ודא כי buffers יש מספיק יכולת והם degasd לפני השימוש. השתמש בפועל ניטור pH זמן כדי לזהות סטיות טרנספורמטיביות.
  • (FLT:0) טמפרטורה של קונטרול: 1FLT שומר על טמפרטורה עקבית לאורך כל התהליך, במיוחד במהלך פעולות ארוכות של החזקת כלים או צמרנים עבור חלבונים רגישים לקור.
  • (FLT:0) לחנך את שיר: FLT:1 להימנע טיפות לחץ פתאומי, קוויטציה, ושפל גבוה לזרום דרך צינורות צרים. השתמש במשאביות דלות (למשל, diaphragm או peristaltic) עבור מוצרים רגישים.
  • (FLT:0)Addייצובers:FLT:1 Include excipients כגון arginine, sucrose, או פוליסרבייט ב buffers כדי לדכא את הגירציה. סוכנים אלה יכולים גם לשפר את ביצועי העמודה על ידי מניעת מחייבת לא ספציפית.
  • (FLT:0) ⁇ inline filtration:cioFLT:1) השתמש מסנני עומק או עמודות שמירה כדי להסיר אגרגות לפני שהם נכנסים מיטות ארוזות או קרומברנס.

אם המשקעים נצפתה במהלך elution, לשקול להתאים את ⁇ (מדרדרדרש shallower, גודל שבריר קטן יותר) או באמצעות pH buffer שונה. עבור שלבים ללכוד, רסטין חלופי עם יכולת גבוהה יותר או כימיה ligand שונה עשוי להפחית את הסיכון של עומס יתר חלבון ומשקעים הבאים. Root לגרום ניתוח צריך לכלול בדיקות של חומרים גולמיים (למשל, איכות, buffer) כדי לשלוט רכיבי graotation או חומרים מונע מתכת.

מיקרוביאלי ו- Endotoxin Contamination

זיהום על ידי חיידקים, פטריות, או endotoxins הוא דאגה רגולטורית העליון בייצור biologics. אפילו רמות נמוכות של endotoxin יכול לגרום לתגובות pyrogenic בחולים, מה שהופך את endotoxin הסרת נקודה שליטה חובה בתהליכים במורד הזרם. זיהום יכול מקורם חומרים גולמיים, ציוד, מערכות מים, או טיפול.

מקורות משותפים

  • מערכת המים של הזרקה (WFI): הטמעת ביופילות הפצה או מיכלי אחסון מציגה אנדווקסינים.
  • (ב) ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇
  • (ב) ,0) הכנת ומחסן: FLT:1 (בתוספת: 0) זמני אחזקה בטמפרטורה מחממת ללא צעדים של הפחתה ביולוגית.
  • (ב) ויקרא י"א: "החלל" (ב) ו"החלל" (ב)" (ב"ב) הוא ה[[המאה ה-20) ו[[1924]], [[1924]]

פתרון בעיות ומייגציה

  • (FLT:0) חיזוק ניקוי ו סניטריזציה: קידמה 1 השתמש אימות מחזורי CIP / SIP עבור כל ציוד תהליך. עבור resins, לעקוב אחר פרוטוקולי ניקוי מאוישים (למשל, נתרן hydroxide, אתנול, או סוכני סניפיות מיוחדים).
  • (ב) [17] ,0 ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇
  • (FLT:0) Endotoxin הסרת צעדים:FLT:1 integrate affinity chromatography (למשל, פאות פולימסין B), hydrophobic אינטראקציה chromatography (HIC), או אולטרה-פרופיל / סינון (UF / DF) להפחתה של endotoxin.
  • (FLT:0) בקרת בטיחות: FLT:1 לשמור על אזורים מסווגים (Grade C או D) עבור פעולות מטה הזרם. בצע ניטור סביבתי שגרתי של משטחים ואוויר.
  • (FLT:0) בדיקות ראוותניות:FLT:1 יישום באינטרנט או ב-line ביובורדן ו- endotoxin Assays (למשל, LAL, rFC, או מערכות זיהוי מיקרוביאלי מהיר) כדי ליירט זיהום מוקדם.

אם הזיהום מתגלה בחבילה, חקירה יסודית חייבת להעריך האם ניתן להחזיר את המוצר באמצעות צעדים נוספים של טיהור או להימחק.תיעוד של כל הפעולות הנאותות ואמצעי מניעה (CAPA) הוא קריטי לבדיקה רגולטורית.

מוצרים נמוכים יימחקו ויחזור

הפסדים של עיבוד במורד הזרם הם לעתים קרובות רב-תכליתיים, מעורבים משיכה ירודה, זיהום מוקדם, ירידה במוצר או הפסדים בהחזקת צעדים. התאוששות נמוכה אינה רק מזיקה מבחינה כלכלית, אלא גם יכול להצביע על יציבות תהליכים תת-אופטימיים. תשואות נמוכות כרוניות עשויות להעיד על צורך בתהליך יסודי בעיצוב מחדש.

זיהוי נקודות אובדן

מחקרים על איזון המונים הם חיוניים.בדרך כלל למדוד ריכוז חלבון (למשל, UV280, אסימונים הכוללים חלבון) ופעילות (למשל, ביוסאאי, אליזה) בכל ניתוח יחידה: הבהרת קציר, לכידת chromatography, טיהור ביניים, שימת לבשה, בידוד ויראלי, ונקודות הפסד משותף של UF/DF כוללות:

  • (ב) ⁇ :0) ⁇ : ⁇ : ⁇ 1:1 ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇
  • (ב) ⁇ :0) ,00 (ה) , ⁇ מעל לקיבולת החייבת הדינמית גורמת לפריצת דרך.
  • (ב) ⁇ :0) ⁇ (ב"ה) , ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇
  • (FLT:0) חוסר יעילות של קונסולת: pH נמוך או אי-החלון מרתיע יכול לגרום לדיבוי חלבון אם לא נשלט בדיוק.
  • (ב) ⁇ :0 (UF/DFrea: 1) מנברון או קיטוב ריכוז מפחית את השטף ויכול להשאיר את המוצר בעקביות או לחלחל.

אופטימיזציה אסטרטגיות

  • (FLT:0)Optimize תנאי מחייב ותמצית:03: איור 1) לבצע ניסויים עקומת פריצת דרך כדי לקבוע יכולת מחייבת דינמית אמיתית. שקול באמצעות רסטין עם יכולת גבוהה יותר או רצועות שונות (למשל, חלבון A resins עם הידרופיליות מוגברת עבור נוגדנים מונוקלוניים).
  • (FLT:0) חשיפה לתנאים קשים:FreaLT:1) להפחית את הזמנים ב pH נמוך (למשל, ב inactivation ויראלי) באמצעות שילוב מהיר ומדויק של שליטה ב- pH. השתמש בשקיקה באינטרנט כדי לחזור במהירות ל- pH נייטרלי לאחר טיפול ב-pH נמוך.
  • (FLT:0) טכנולוגיות אנליטיות של תהליך האנליטיקה (PAT): IRLT:1) On-line UV, מוליכות וחיישנים pH מאפשרים ניטור בזמן אמת של ריכוז החלבון ויכולים באופן אוטומטי לגרום לאוסף או להחלפת עמודה כדי ללכוד את שיא המוצר באופן מדויק.
  • (FLT:0) שיפור ביצועים: ההרחבה 1 (Imrovroven: ⁇ 1) בחר UF membranes עם חיתוך משקל מולקולרית נאותה חיתוך חיתוך משקל (MWCO) וחלבון נמוך מחייב.
  • (FLT:0) עיבוד מתמשך: 1.FLT:1 chromatography רב-קולוני (למשל, chromatography תקופתית נגד-הווה, PCC) יכול להגדיל את ניצול השרף ולהגביר את התשואה בהשוואה למבצע אצווה.

עבור תשואה נמוכה מתמשכת, לשקול חקירה שורש באמצעות כלים כגון דיאגרמות דגים, מצב כשלון ואפקט ניתוח (FMEA), ועיצוב ניסויים (DoE) כדי לבדוק באופן שיטתי משתנים כגון buffer pH, כוח איטוני, קצב זרימה, ועמודה אריזה איכות. שיתוף פעולה בין קבוצות תרבות תאי upstream וצוותי מטה הזרם הוא חיוני, כמו תכונות איכות המוצר (למשל, גירוי, גלגולציה, גליקוציה, גליקולציה, השפעה ישירה).

Chromatography Peak Tailing ו- Poor resolution

סימטריה פסגה - זנב או חזית - ב chromatograms הוא אינדיקטור נפוץ של בעיות ביצועי עמודה. החלטה גרועה בין מוצר וזיהומים (כגון צ'קקטורים, גרסאות מטען, או חלבונים תאים מארחים) מוביל לקביעת החלטות הקרבה נכנעה לטוהר או להיפך.

גורם

  • (ב) [15] ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇
  • (ב) [15] ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇
  • (FLT:0) ללא מפרט מחייב: 1FLT:1 hydrophobic או ionic אינטראקציות עם עמוד השדרה של שרף יכול לגרום לירידה איטית וזינב.
  • (ב) תנאי buffer:0) , pH או מוליכות אשר מקדם קינטיקה מחייבת או איטית.
  • (ב) שיעור זרימת התפוצה: FLT:1 מקטין את זמן המגורים ומגביר את התפשטות הלהקה.

פתרון צעדים

  • (FLT:0)Check טוראז': FLT:1 בצע בדיקת יעילות עמודה (למשל, גובה שווה לסוללה תיאורטית, HETP וגורם סימטריה באמצעות מולקולה קטנה כמו אצטון) או להחליף את העמודה אם HETP הוא מחוץ מפרטים.
  • (FLT:0) Clean the resin: FLT:1rea השתמש בפרוטוקולים של ניקוי מוכר-recommend להסרת מפגעים.עבור חלבונים A resins, ניקוי אלקליין עם 0.1-1 מ"נOH הוא נפוץ; עבור חילופי יון, מחזורי חומצה והתחדשות בסיס עשוי להיות נחוץ.
  • (FLT:0)Optimize buffer pH ומלח ⁇ : FLT:1 השתמש DoE כדי לזהות תנאים הממקסמים את ההחלטה בין מוצר היעד לבין חוסר הכדאיות הקרוב ביותר.שלב ⁇ s לפעמים יכול לחדד שיאים, אבל לינארי ⁇ בדרך כלל לספק שליטה טובה יותר.
  • שיעור זרימת התפוצה:0 (FLT:103) נמוך יותר את העומס ואת זרימת השפע כדי להגדיל את זמן המגורים ולשפר את העברת ההמונים.זה מועיל במיוחד עבור מולקולות גדולות עם דיפרנציות איטיות.
  • (FLT:0) שרידים חלופיים: FIRLT:1 , Resins עם גודל חלקיקים קטן יותר (למשל, 30-50 μm) או שיפור הכימיה הרצועות (למשל, התחדשות עם שילוב ותכונות HIC) יכול לשפר את ההחלטה.

אפיון אנליטי של המוצר הממוזג - כגון גודל של כרומוזומטולוגיה (SEC), ניתוח אולטרה סגול (IEC או CIEF), וחלבון תא מארח אלISA - יאשר אם ההחלטה השתפרה.היישם באינטרנט או ניטור מקוון של תכונות איכות המוצר יכול לספק משוב מיידי במהלך פיתוח ופתרון בעיות.

Membrane Fouling in Ultrafiltration / Diafiltration

פעולות UF / DF משמשים לריכוז והחלפת חיץ, אבל מרעה membrane היא מכשול תכוף המקטין את flux, מגביר את זמן העיבוד, ויכול לגרום לאובדן המוצר או נזק. מחיקת תוצאות מן הפירוק של חלבון מצטבר, שומנים, או רכיבי מזון אחרים על פני השטח membrane או בתוך הנקבוביות שלה.

סימנים וגורמים

ירידה בשטף permeate לאורך זמן, הגדלת לחץ טרמברנה (TMP), או פריצת דרך מוצר עבור permeate כל מצביע על עבירה.

  • (ב) ריכוז חלבון גבוה:0) ריכוז חלבון גבוה: 1FLT:1 ריכוז של קיטוב וג'ל שכבת ג'ל על פני השטח של קרום.
  • (ב) ,0) ,התעדויות של צ'יפס או חלקיות: כישלונות של קדמה 1:1 מאפשרים מינים גדולים יותר להגיע למזכר.
  • (FLT:0) חומר מנברון לא מתאים: FIRLT:1 וכמה membranes יש חלבון גבוה מחייב (למשל, פוליסולון), בעוד אחרים (למשל, צלוליקול) הם יותר הידרופיליים.
  • (ב) ,0) ,[דרוש מקור]: ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇
  • (ב) PH:0) חוסר תיקון או כוח ionic: FIRLT:1 יכול להוביל למשקעים חלבון ליד הנקודה האופטיבית.

אסטרטגיות מייגציה

  • (FLT:0) אופטימיזציה של מזון לפני טיפול: ראטמאלף 1) השתמש בסינון עומק או צנטריפוגה לפני UF כדי להסיר חלקיקים.
  • (FLT:0Select את המזכר הנכון: ⁇ 1) השתמש במזכרים המכילים חלבון נמוך (למשל, תאווז או פוליאתרסלון עם ציפוי הידרופילי) עם MWCO מתאים (בדרך כלל 30-50 k עבור mAbs).
  • (FLT:0)Control flux ו-TMP:03F:031) מאופרות מתחת לשפעת הקריטית כדי להימנע מפגיעה מהירה. השתמש במבצע קבוע עם בקרת TMP אוטומטית.
  • (FLT:0) הגבלת מהירות זרימת זרימת זרימת הדם: 1FLT: 1) שיעור הזנה גבוה יותר משפר את העברת המסה ומפחית את הקיטוב של ריכוז.
  • (FLT:0) ,החזרה זמנית או ניקוי:FLT) 1 כמה מערכות מאפשרות כאבי גב אוטומטיים כדי להתפורר שכבות מרעישות.
  • (FLT:0) diafiltration Modes:cioFLT:1 , diafiltration בריכוזי חלבון נמוכים כדי לשמור על יכולת.

אם מתרחשת עקיצות נרחבות, לשקול מעבר לסינון חד-צדדי של זרימה חד-צדדית (SPTFF) עבור יישומים ריכוזיים גבוהים, אשר מפחיתים את המשאבה של שר וזמני מגורים. הבנה עמוקה של הפרמטרים הקריטיים של תהליכים ותכונות איכות (CPPs/CQAs) כפי שתואר ב FLT:0 הדרכה FDA על איכות על ידי עיצובFLT יכול לעזור לעצב יותר UFD / שלבים חזקים יותר.

מחסור בחשיפה

סוכנויות רגולציה דורשות שני צעדים של הפחתה של וירוסים חזקים עבור biologics המיוצרים מתרבויות תאים ממאמניים.כישלונות בניקוי ויראלי - או ירידה לא מספיק או פריצת דרך - יכול לעצור את ההתפתחות הקלינית או לדרוש דחייה.בעיות נפוצות כוללים חוסר יעילות ( pH נמוך, הרתעה, או חום) או הסרת (ננות, chromat) בשל תהליכים הסטיגמטיים.

פתרון ל-Viral Inactivation

  • (FLT:0)לאו pH inactivation:FreaLT:1) להבטיח pH הוא באופן עקבי ⁇ 3.5 (או לטווח מאומת) עבור זמן התחזוקה הנדרש (בדרך כלל 30-60 דקות) תערובת עני, התאמה לא שלמה, או סחף pH יכול להפחית את היעילות. השתמש מוליכות קו ו- pH בדיקה עם שליטה אוטומטית.
  • (FLT:0) inactivation:FreaLT:1) לבדוק ריכוז וגאווה נאותה של מעצורים / מעצורים (למשל, Triton X-100, Polysorbate 80). לבדוק עבור הפרדה בשלב או משקעים. השתמש במבנים סטריליים מראש.
  • (ב) שליטה בחיות:0) ,(FLT:1) לשמור על הטמפרטורה בטווח מאומת, כמו קינטיקה של פעילות הם תלות טמפרטורה.
  • (FLT:0Sampling and Analysis: FLT:1eur) השתמש במחקרי וירוסים מתאימים כדי לאמת מודלים בקנה מידה של תפוקה.exe באופן קבוע אימות תהליכים באמצעות וירוסים חלופיים או חלבונים אינדיקטור.

בעיות ב-Nanofiltration

  • (FLT:0) ,mebrane היושרה:FLT:1u, ביצוע בדיקות יושרה לאחר שימוש (למשל, לחץ להחזיק, דיפוזיה או כפיים פלואורסנס) כדי לזהות דליפות או פיות.
  • (FLT:0) עיבוד וצמצום זרימת:FLT:1 Prefiltration להסרת צ'רצ'ים הוא חיוני; אחרת, ננומטים יכולים לגזול, מה שמוביל ללחץ ולהתעלות פוטנציאלית.
  • (FLT:0) תיקון מסנן בחירה: FLT:1 בחר ננומטר עם גדלים פוארים האומת עבור וירוס היעד (למשל, 20 nm עבור הסרת parvovirus) להבטיח תאימות עם הפרמטרים של תהליכים (pH, לחץ, ריכוז חלבון).

אם ביצועי ההנקה הנגיאלית נמצאים חסרי השפעה במהלך אימות, לבצע ניתוח פער כדי לזהות איזה שלב(ים) אינם עומדים בפני מטרות הפחתה של תהליך שינויים - כגון הרחבת המימוש של זמן, הגדלת ריכוז ההרתעה, הוספת צעד ננומטרה שני, או יישום טכניקת בטיחות אוטגולאלית כגון קרינת UV-C-C- ייתכן שיידרשו שינויים כלשהם יש לתקן ולאישור על ידי הרגולטור (RCH5) (IRCH) 1D).

Best Practices for Systematic Troubleshooting

פתרון בעיות יעיל דורש יותר מאשר תיקונים ריאקציוניים; הוא דורש תרבות של שיפור מתמשך נתמך על ידי ניתוח נתונים קפדני, שיתוף פעולה בין-תפקודי, ודבקות באיכות על ידי עיצוב (QbD) עקרונות.הפרקים הבאים לבנות בסיס חזק לפתרון בעיות במהירות ומניעת הישנות.

ניתוח שורש (RCA)

כאשר מתרחשת סטייה, להרכיב צוות עם מומחיות בהנדסת תהליכים, פיתוח אנליטי ואבטחת איכות. השתמש בשיטות RCA בנוי כגון:

  • (FLT:0) Fishbone (Ishikawa) דיאגרמת: טרנספורמצית המוח של ראט"ר:1 כל הגורמים האפשריים בקטגוריות (אדם, מכונה, שיטה, חומר, מדידה, סביבה).
  • (ב) ויקרא: "למה" (בראשית כ"ד) "לבקש" (בראשית כ"ד) ל"למה" למקד את הסימפטום לגורם יסודי.
  • (ב) עיין ב[[1924]]: [[1924]]]]

מסמך החקירה ביסודיות, כולל ראיות של יומני נתונים, ראיונות המפעילים ובדיקות מעבדה. CAPA חייב לטפל בגורם השורש, לא רק בסימפטום.

תהליך טכנולוגיה אנליטית (PAT) ו-Time Monitoring

יישום כלים PAT - כגון ספקטרום UV spectroscopy, Raman spectroscopy, או ליד- infrared (NIR) - מאפשר מעקב בזמן אמת של ריכוז המוצר, aggregation, ו פרמטרים קריטי buffer. נתונים אלה לא רק תומך בפתרון בעיות על ידי מתן חותמת זמן גבוהה של תנאים, אבל גם מאפשר תהליך כדי למנוע סטייה, לדוגמה, על ידי רזולוציה של חלקיקים בלתי-מסוגים יכול להגביר את הפחתת אור.

תכנון ניסויים (DoE) ו- Multivariate Analysis

לעתים קרובות פתרון בעיות כרוך בדיקות משתנים רבים.עיצובים מסורתיים חד-מנועי (OFAT) הניסויים אינם יעילים ועשויים להחמיץ אינטראקציות.DoE באמצעות עיצובים של משטח גורם או תגובה מזהה ביעילות גורמים משמעותיים והגדרות אופטימליות. Multivariate נתונים ניתוח (MVDA) של נתונים אצווה היסטוריים יכול לחשוף התאמות בין הפרמטרים ותשואות איכות שאינן ניכרות על ידי ניתוח לא-רומטי אלה הם כלי רזולוציה גבוהה במיוחד עבור בעיות זנב.

מסמכים וניהול ידע

לשמור רשומות אצווה מפורטות שלוכדות נקודות, קוראות בפועל, סטיות, ותצפיות המפעילות.מערכת אלקטרונית מודרנית (EBR) יכולה לאסוף באופן אוטומטי נתונים ממערכות בקרה מבוזרות וכלי מעבדה, המאפשרות סקירה מהירה במהלך חקירות.שיעורים של כל אירוע פתרון בעיות צריך להיות משותף בבסיס ידע ארגוני, נהלים תפעוליים מעודכנים (SOPs), ושותף באתרי הדרכה חיצונית מ-FLT: 1.com: שיפור ביו-A.

שיתוף פעולה בין פיתוח תהליכים וייצור

בעיות שצצות במהלך הייצור המסחרי לעתים קרובות יש שורש גורם בתכנון תהליכים או בקנה מידה. תקשורת קרובה בין צוות הפיתוח (שמבינים את תהליך רציונלית ומרחב עיצוב) וצוות הייצור (שמטפלים בפעילות יומיומית) מאיצה את פתרון הבעיה.

מסקנה

פתרון עיבוד במורד הזרם של ביולוגים הוא משמעת רב-תכליתית המשלבת ידע טכני, חקירה שיטתית ותרבות יעילה באיכות יעילה.בעיות נפוצות כגון הדבקה של חלבון, זיהום, תשואה נמוכה, פתרון chromatography גרוע, membrane דיסיעה מתפתחת, וניקוי ויראלי כל אחד דורש גישה מותאמת אשר רואה את המאפיינים הייחודיים של המוצר והתהליך.