השילוב המוצלח של פיגומים סינתטיים וביולוגיהיים נשאר אחד היעדים המאתגרים ביותר בהנדסת רקמות ורפואה רגנרטיבית. בעוד תשומת לב רבה מתמקדת בטכניקה כירורגית, בבחירה חומרית ובתכונות מכניות, האינטראקציה הביולוגית בין הרקמה הפיתח והמארחת בסופו של דבר קובעת את הגמישות והתפקוד של זמן קצר, בלי קשר זה, היא גם השפעה תאית (EC) דינמית, שלוש דחיסה תלת מימדית של אותות מאקרו-ממדיים מהירים, אך ורק אם כן, אשר מספקים את רכיבי תאים פנימיים קריטיים, אך ורק עיצוב תאיים.

הבנת המטריקס ה-Extracell: הקומפוזיציה והתפקוד

ממטריקס תוספתי הוא הרבה יותר מאשר ממלא אינרט בין תאים.It הוא מאופיין מאוד מאורגן, ספציפי רקמות המורכב תערובת מורכבת של חלבונים fibrous, גליקופרוטאינים, proteoglycans, ו גליגליקומניקים (GAGs) רכיבים אלה הם גם מוסתרים על ידי תאים מקומיים - בעיקר fibroblasts, תאים קצה-al, תאים חלק ותאים משולבים, כולל CMicial, כולל לחץ דם חיוני, כולל CMivic, כולל השפעות דלקתיות, כמעט, 000.

ווסקולרי ECM יכול להיות מחולק באופן רחב לשלוש שכבות: את intima (המרתף הקרנית המרתף), את התקשורת של טוניקה (שכבות תאי שריר סמוית עם שפע elastin ו קולגן), ואת הופעת הליטניקה של הליטניקה המתאימה (איורים עשירים באופן פעיל) כל שכבה יש מחסנית ECM ייחודית המכתיבת את התכונות מכניות והזהההההההת שלה.

מפתח ECM Components באינטגרציה סאפרידית

קולאנס: עמוד השדרה השברירי ו-Desing Substrates

קולגנס הם החלבונים השפעים ביותר ב- ECM, המספקים כוח רב-עוצמה ושלמות מבנית לכלי הדם.ברקמות vascular, הקלד I וטיפוס III התנגשויות לפני הספירה, עם סוג שאני מעניק כוח מכני גבוה וסוג III תורם ל- βtotic.comn סיבים יוצרים רשת fibrillar כי לא רק מתנגדת תחת כוחות hemodynamic אלא גם מציג אתרים ספציפיים מחייבים - כמו Gegn1 βtα הוא מפעיל בעיקר תאים βtα.

בהקשר של שילוב vascular scaffold, ציפוי קולגן או הידרוג'ל המכיל קולגן הוכח כדי לשפר את הדבקות בתא אנדואלי והישרדות FLT:0in vitroFLT:1 ו במודלים של בעלי חיים.לדוגמה, גליפולנס אלקטרופרומינליים הקשורים לנגנציה פיזית של HIV (Impuntens) עם שיטות אלקטרופרוטומטיזציה מהירה של דלקת ריאות (OFic) כמו מחסנים) עם , כגון זיהומים חשמליים).

Elastin: Reאחסן את ואסרקולנס

Elastin הוא רכיב ECM המפתח האחראי על רתיעה גמישה של העורקים.זה יוצר רשתות מחוברות, amorphous המאפשר כלי שיט להתרחב במהלך סינסטל ולחזור לממדיים המקוריים שלהם במהלך diastole. הנכס הזה הוא קריטי לשמירה על זרימת דם רציפה ולמנוע אובדן אנרגיה במערכת הלב וכלי דם סינתטי.

שילוב elastin או elastin-like peptides לתוך scaffolds פולשני יכול לשפר את תאימות ולהפחית סיבוכים אלה. טרופולסטין, מבשר soluble של elastin, יכול להיות אלקטרוספun או מחובר צלב לתוך הפיגום מדויק כדי לספק סיבים גמישים. בנוסף, סטיות אפילפטיסטיות סטיות ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇

Fibronectin: Orchestrating Cell Adhesion ו-Wound Healing

Fibronectin הוא גדול, dimeric גליקוליום קיים בצורת סויה פלזמה וכ fibrils in ECM.It ממלא תפקיד קריטי בדבקות תאים, הגירה, וריפוי הפצע על ידי מחייב קולטנים דלקתיים אנדלוסיים (במיוחד α51 ו-αvβ3) ו- ECM אחרים כגון קולגן מעגלי המכיל רצף חשמלי פעיל (כולל RGD) מכיל s) פונקציונליות מרובות.

עבור שילוב scaffoldvascular, משטחים ציפוי עם fibronectin או שילוב מוטיב RGD שלה לתוך פולימרים סינתטיים משפר באופן משמעותי כיסוי תאים קצהילי ולהפחית את החתך צלחת.עם זאת, השימוש של שרירנים באורך מלא יש סיכונים של שידור פתוגן ו-Avenial t-to-batch variability.SRGD RGD eptides הם אלטרנטיבה מבוקרת יותר, אבל הם לא ניתן לקדם את הפחתת הפחתת החלבון ספציפי קידוד כולל זה הוביל באופן מלא של התפתחותי.

Laminins: Guiding Endothlial ו- Smooth השרירים התנהגות

Laminins הם משפחה של חלבונים heterotrimeric המרתף כי לשחק תפקיד מרכזי בפיתוחvascular ואת ההומוסטזה. הם אינטראקציה עם integrins (α6β1, α7β1, α3β ו dystroglycan כדי להסדיר את הגוון התאי, תפקוד, ו angiogenesis ב vascular, במיוחד unaterams 511 תאים.

שילוב laminin לתוך vascular פיגומים יכול לקדם את endotialization מהיר להפחית את הסיכון של hyperplasia ניאוintimal. Laminin ציפויים החלים על ePTFE grafts הוכח להגדיל את שימור תאים קצה-החללית תחת תנאי זרימה מתאימים במודלים של חיות. Laminin-derive peptived peptived peptides, כגון YIGSR ו- IVVVA, הם לעתים קרובות פונקציות אלקטרואקטיביות אלה הם לעתים קרובות.

Proteoglycans ו Glycosaminoglycans: הידרציה וצמיחה

Proteoglycans (PGs) מורכב חלבון ליבה עם glycosaminoglycan המצורפת covalently (GAG) שרשראות - ארוך, לא מוחץ פוליsaccharides כי הם מאוד טעון שלילי. GAGcular העיקריים כוללים אותות heparan sulfate, chondroin sulfate, דרמטי, ו hyuricreicial מולקולות אלה.

בעיצוב vascular scaffold, GAGs כגון חומצה היאלורונית והואparin הם בשימוש נרחב כדי לשפר את ביו-גמישות ואת הביואקטיביות. חומצה Hyaluronic, GAG שאינם מסולפים GAGot כי הוא בשפע ב ECM של כלי פיתוח ובמהלך ריפוי הפצע, מקדם התפשטות תאים באמצעות CD44 ו RHAMMs סינתטיים.

מנגנונים של אינטגרציה ספוגה ECM-Mediated Scaffold

תאים Adhesion and Migration

הצעד הראשון באינטגרציה ספוגה הוא ההחזקה של תאים מארחים - במיוחד תאים endotal, תאים שרירים חלק, ו fibroblasts - אל פני השטח החומרי. רכיבי ECM לספק אתרים ספציפיים זיהוי קולטנים אינסטיפריים על תאים אלה יכול למנוע. Integrin מעורבות גורם קידוד מוקד, הפעלת אותות כגון FAK, Src, ו- PIK3-APTS מקדם דחיסות מורכבות).

לאחר המצורף, תאים חייבים לעבור דרך השפע כדי למפות את כל רכיבי ה- graft. ECM להשפיע על מהירות הגירה ומציאות דרך ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇

התפשטות תאים והפרדה

מולקולות ECM מספקות לא רק אתרי דבק אלא גם אותות פרו-חיים ובדלניים. Binding של integrins ל- ECM ligands מפעילה את מסלול ראס-ERK, המוביל לביטוי מחזורי והתקדמות מחזור תאים. גורמי צמיחה שעדיין ספגו את ה- ECM- כגון TGF-FGFGF, ו-GFGF - שוחרר על ידי תעמולה ישירה של תאים, ובכך מעכבת תאים ספציפיים.

הבחנה היא גם חיונית: לדוגמה, תאי שריר חלקיים חייבים לאמץ פנוטיפ חוזה כדי ליצור טון ניאוב פונקציונלי, בעוד תאים נוסטליים חייב ליצור מונוקולת quiescent עם צומת הדוק כדי למנוע רצף מתאים של lastombosis. Elastin ו laminin לקדם את לוח השרירים חלק על ידי הפעלת α intragrin ולהפחית אותות דלקתיים מוקדם של תאים מתוחים, אבל אדורג 'מדומים', אם כי הוא מסוגל להמשיך לתקן תאים מסוימים של תאים מתוחים, אבל מתאים, אבל CMnative atrarative arative תאים.

אנגוגנזה ואסקוליזציה

אספקת דם בולטת היא חיונית להישרדות ואינטגרציה של הפיגומה הראשונית (~200 מיקרומטר) ECM מספק תבנית מבנית עבור היווצרות כוויות קפילארי חדש ומאגרי עבור גורמי צמיחה אגוגניים. במהלך angiogenesis, תאים אנדלוסיים IV de the סביב ECM באמצעות MMPs, ולאחר מכן נודדים ו proLiferate לתוך השפע של הקיבולת של ה- ECMin, כגון ייצוב, תמיכה סיבירית, ו-reperin, כגון ייצוב של כלי דם, כגון ייצוב, תמיכה סיבירית; ייצוב, ו- ECM, תמיכה סיבירית, כגון מחזור הדם.

שילוב של רכיבים ECM Pro-angiogenic לתוך scaffolds יכול להאיץ ניאוvascularization. heparan sulfate proteoglycans immobilize VEGF ו bFGF, למנוע את ה diffusion שלהם להאריך את הביואקטיביות שלהם. Hyaluronic acids (משקל מולקולרי קטן) יכול לעורר באופן ישיר אנגינזה באמצעות אינטראקציות עם CD44 ו-LR2 מקודמים מופחתים אלה.

Immune Modulation ו- Inflammation

תגובת הגוף הזר להשתלת פיגומים היא מחסום מרכזי לאינטגרציה. רכיבי ECM ממלאים תפקיד כפול בהפעלת הסביבה החיסונית. מצד אחד, ECM שלם, מאורגן היטב - כגון רקמת ילידת דה-תאי - לעתים קרובות משחררת ריבונית, אנטי דלקתית מקרופילמנט (M2-), מאופיינת על ידי ביטוי גבוה ונמוך - β--1, יכול לקדם חלבונים מדגמיים אחרים.

פטידים בעלי יכולת פעולה משותפת, שברים fibronectin, וחומצה היאלורונית אוליגוספוסאקצ'רידים כולם הוכחו לעסוק קולטנים דמויי אגרה (TLRs) ולהפעיל אותות חיסוניים.הדחיסות, הדחיסות, הקונפורמציה, וקישורים באופן פעיל של רכיבי ECM, לכן לקבוע את הפרופיל החיסוני של ה-Dropedic Decellic Decelled.

אסטרטגיות נוכחיות לשילוב ECM Components לתוך ווסקולרי Scaffolds

ריצוף ותפקוד ביוכימי

הגישה הפשוטה ביותר היא למעיל משטחים אלקטרו-אפילטיים (למשל, ePTFE, Dacron, Polycaprolactone) עם חלבונים ECM מבוזר או peptide מחקה.שיטות מקוטבות כוללות מודעות פיזיות, covalent grafting באמצעות כימיה carbodiimide, ושכבה-by-layer deposition הוא פשוט תוצאה של ירידה מהירה בתנאי אנרגנציה של חלבון קוגניציה יכול לשנות יותר.

חומרים ציפוי נפוצים כוללים greagen, fibronectin, laminin, ו heparin. הצלחה קלינית דווח על heparin-coated grafts, אשר אושר לשימוש באירופה ואסיה עם סיבוכים מוקדמים thrombotic. עם זאת, heparin לבד לא מספק ביואקטיביות לטווח ארוך; ציפויים הכוללים גורמי צמיחה או חלבונים סלולאריים הם דוגמה נוספת של ציפויים של בעלי חיים.

ECM Scaffolds

Decellization של כלי דם מקומיים (allograft או xenograft) מסיר מרכיבים סלולריים תוך שמירה על אדריכלות ECM הילידים, כולל קולגן, Elastin, GAGs, וחלבונים מרחץ מרחץ מרחץ. גישה זו שומרת על רמזים ביוכימיים ומכניים מורכבים כי scaffolds נאבק כדי לשכפל. Decorchine או כלי בום מסחרי זמינים עבור כמה יישומים aicial (או עורקים).

שיטות כימיות באמצעות משככי (למשל, SDS, Triton X-100) וטיפולים אנזאיים (למשל, DNase) משמשים להסרת תאים, אבל העיבוד יכול לשנות את הקומפוזיציה ECM ומכניקה.פרוטוקולים חדשים יותר שואפים לשמור על רכיבי ECM נוספים, כגון GAGs וגורמי צמיחה, על ידי שימוש סוכנים קלים יותר כמו חומצה peracetic.

היברידית ו- Composite Scaffolds

מספריים היברידיים משלבים פולימרים סינתטיים עם רכיבים ECM טבעיים כדי למנף את החוזק של שניהם. Synthetic פולימרים (למשל, PCL, PLGA, Polyurethane) לספק תכונות מכניות בעלות שליטה, ייצור הדדי, וירידה איטית, בעוד רכיבי ECM מוסיפים bioactivity מסוימת.לדוגמה, סיבי PCspunage סינתטיים עם CMDs מקוטבים עם CMDicage ו- chroited כדי ליצור גישה משולבת תאים משולבים תאים חדשים.

עיצוב היברידי מבטיח אחד הוא את השפע "בי-שכבות" כי לחקות את המבנה של intima-media-adventitia של כלי Native.השכבה הפנימית ניתן לקשור עם laminin ו קולגן כדי לתמוך אנדרוטיום confluent, בעוד השכבה החיצונית כוללת elastin וחלק תאים אדסנסטיביים כדי לקדם רקמת מדיה.

3D Bioprinting ואלקטרוסנסיטינג עם ECM Bioinks

טכנולוגיות ייצור גמישות מאפשרות קביעת מרחבית מדויקת של bioinks מבוססי ECM כדי ליצור פיגומים ספציפיים לחולה-במיוחד vascular. bioinks בדרך כלל מורכב הידרוגללים (למשל, algin, ג'לטין methacryloyl, חומצה היאלורונית) עם רכיבים נוספים ECM, בשילוב עם תאים חיים אם רצויים של התכונות הביו-דלקתיות חייב להיות מותאם אישית עבור מבנה photo- ⁇ .

אלקטרוספינינג נשאר שיטה פופולרית עבור ייצור ננופיברווס פיגומים שמחישים את הארכיטקטורה של Native ECM.טכניקה מאפשרת שילוב של רכיבי ECM על ידי פירוק אותם עם פולימרים סינתטיים בפתרון המסתובב. לדוגמה, elastin ו קולגן היו co-electrospun עם PCL כדי לייצר סיבים עם תכונות מכניות ו ביואקטיביות.

אתגרים קליניים וכיוונים עתידיים

חוסר נאמנות וזמינות

בעוד רכיבי ECM נחשבים בדרך כלל ביו-תואמים, הם עדיין יכולים לעורר תגובות חיסוניות, במיוחד אם נגזר ממקורות לא-אנושיים. Xenograft ECM עשוי להכיל α-Gal אפיטופים או אנטיגנים אחרים אשר מעוררים דחייה היפר-אצנטית בבני אדם. Recombinant Human ECM חלבונים, אם כי יקר, מציעים פתרון על ידי חיסול אנטיגנים xenogenic בנוסף, עודף-קישורים לא יכול ליצור תגובה חיסונית פשוטה של דלקת אפילפטית הוא גורם דלקת אפילפטית טיפול תרופתית טיפול תרופתית הוא גורם דלקת קומפקטית טיפולית יעילה.

אינטגרטיביות מכנית ו-Vvo Reמודלing

אחד האתגרים הגדולים ביותר הוא התאמת התכונות המכאניות של הנבל ל תאימות כלי שיט הילידים.אם הספידר הוא נוקשה מדי, זה יכול לגרום ציות לאות, המוביל היפרפליגזיה intimal באסטומיוזיס; מקביל מדי, וזה יכול להיות קרע תחת לחץ מכני של ECM יכול לשפר תאימות, אבל הם גם degrading overtime. שיעור של הפיגום הישן חייב להיות מאוזנת תאים חדשים של CMD.

לטווח ארוך ו- Neotissue Formation

ניסויים קליניים של grafts המכילה אשכוליות הראו פטיות ארוכת טווח משתנה לטווח ארוך.לדוגמה, decellized Human saphenous ו- grafts שימשו ביישומים קטנים עם הצלחה מתונה, אבל בעיות עם stenosis מתעקש.הפסל האידיאלי צריך לקדם היווצרות מהירה של קצה קוגני, לא-תרגיל; שכבת יציבה, יציבה, עם שילוב של תאים מרכזיים, כדי להשיג את המטרות של ECMia.

ECM Scaffolds

ההתקדמות ביו-fabricationcation ודמיית ספציפית לחולה (למשל, אנגוגרפיה CT) מאפשרת עיצוב של פיגומים שמתאימים לגיאומטריה וההודינמיקה של הvasculature של המטופל יחיד.שלב זה עם ECM הרכב מותאם לגורמי סיכון המטופל (למשל, סוכרת, או ב- טרשת עורקים) יכול לשפר את הרעיון הזה עם ECM, אך לא רק כדי לנבא את תפקוד הדחיסה של תאים שונים, אלא גם את אופן פעולתו של ECM.

משלוחים ו- Gene Editing

רכיבי ECM יכולים לשמש כמחסנים לשחרור מבוקר של גורמי צמיחה אשר משפרים את האינטגרציה.לדוגמה, heparin מחייב VEGF ו- FGF, או את המחייב של TGF-β ל fibrillin, ניתן לנצל כדי ליצור שלבים מוקדמים כי שחרור גורמים אלה באופן מרחבי וזמני.

מסלול תגמול ותרגום מסחרי

אישור רגולטורי עבור grafts המכילה ECM המכיל vascular מורכב בשל שילוב של רכיבים ביולוגיים וסינטטיים. בארצות הברית, מכשירים אלה מסווגים בדרך כלל כמוצרים שילוב ודורשים הערכה קלינית נרחבת של ביו-קופטיות, בטיחות מכנית וביצועים ביולוגיים. ה- FDA הוציא הדרכה על מוצרי רקמות decellized אבל נזק לסטנדרטים עבור affolds המבוססים על ECM עדיין מתפתח, למרות כמה מוצרים קליניים סטנדרטיים אלה.

לסיכום, המרטריקס התוספתי אינו רק מבנה תמיכה אלא משתתף פעיל באינטגרציה דו-פעמית של רכיביה - collagens, elastin, fibronectin, laminins, ו- GAGs - לספק רמזים חיוניים עבור התפתחות דלקת מפרקים, הגירה, התפשטות, שילוב פונקציונלי, שילוב, agiogenesis, ו- חיסון על ידי שילוב אלה לתוך תרכובות מחזוריות, במיוחד על פני השטחיות, הם ממשיכים לשמור על ידי שילוב של מחסנים היברידית גבוהה יותר, במיוחד על ידי מערכות חיסון.

מקור:0 (ב) 1

  • (ב) טבע (בלטינית:0) מציג קרדיולוגיה: ממטריקס נוסף בפיתוח vascular and DiseaseFillos 1
  • (ב) ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇
  • (ב) ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇
  • (ב) ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇
  • (ב) ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇