הבטחת גידול ב Chromatography: מדריך מקיף למזער אובדן וזיהום

Chromatography נשאר אבן הפינה של כימיה אנליטית עבור הפרדה, זיהוי, ורכיבים קוונטיים בתערובת מורכבת.מבקרת איכות תרופות ניטור סביבתי, האמינות של תוצאות chromatographic תלויה ביושרה של דגימות לאורך זרימת העבודה אנליטית.אפילו אובדן דגימות קטן או זיהום יכול להחליק תוצאות, erode Reproducibility, ומובילה לשיתוק יקר או שגוי זה מספק מסקנות עמוקות, כדי למנוע שיטות יעילות עבור כל הדגימה, כדי להשיג את התוצאות הטובות ביותר, כדי להשיג את התוצאות הטובות ביותר, כדי למנוע שיטות איכות, כדי להשיג.

הבנת ההשפעה של אובדן הדגימה והזיהום

ההשלכות של שלמות הדגימה הנפגעת משתרעות מעבר להזרקה כושלת יחידה.אובדן דגימות, המוגדרות כהפחתה בריכוז או נפח שאינו משקף את הדגימה המקורית, יכול לגרום להפחתה של תרכובות מטרה, לקביעת מגבלות גבוהות באופן מלאכותי, ואובדן רגישות. זיהום - מבוא של חומרים מיותרים - יכול לגרום לחיובי שקר, עם פסגות אנאליות, עמודה, וירידה במערכת כגון בעיות GLP היא קריטית, או טיפול.

מקורות נפוצים של אובדן דגימות בצ'רומטולוגיה

צילום: Container Surfaces

אחד הגורמים הנפוצים ביותר לאובדן דגימות הוא מודעות של תרכובות אנאליות לקירות של דרך שבילים, טיפים צינורות, או מיכלי autosampler.זה בעייתי במיוחד עבור תרכובות הידרופוביות, peptides, או פילאיטים שיכולים לקשור זכוכית או משטחים פלסטיק לא מטופלים. לדוגמה, הורמונים סטרואידים נמוך ריכוז עשוי להיות מודעות לפוליפרן באמצעות סמרטוט נמוך, כגון חומרים מפולנים או מזכוכית מנקה.

התחממות והערכה

נוגדנים וולטיל, כגון פותרים אורגניים, פחמימנים קלים, או תרכובות מסוימות מעוותות, רגישים להתמדה במהלך הכנת הדגימה ואחסון.יציאה דרך שבילים פתוחים או באמצעות איטום לא תקין יכול להוביל לאובדן המוני משמעותי.גם כאשר אטום, evaporation דרך septa או caps יכול להתרחש לאורך זמן.

הפחתה כימית וחוסר יכולת

הרבה אריות אנאליות הן בלתי יציבות בתנאים מסוימים. Photodegradation, hydrolysis, חמצון, או פעילות אנזומטית יכול להפוך את ה- אנאליטה למינים שונים, למעשה לאבד את מולקולה המטרה.לדוגמה, אנטיביוטיקה sulfonamide יכול לפענוח פתרונות חומציים, בעוד כמה חומרי הדברה הידרוזה במים פתרון בלתי אפשרי להילחם זה, ייצוב באמצעות דגימות זמן, כגון הדבקה, לעומת הדבקה, הגנה מפני הדבקה, חומרים פגומים, או יותר, יש צורך לשלוט על ידי הדבקה, עם הדבקה, חומרים מאובטחים, עם מזהמים, עם מזהמים, עם מזהמים, עם מזהמים, עם מזהמים, עם מזהמים, כדי להגן על ידי מזהמים, עם מזהמים, עם מזהמים, כדי להגן על ידי הדבקה, עם מזהמים, עם מזהמים, עם מזהמים, עם מזהמים, עם מזהמים, עם מזהמים, עם מזהמים, עם מזהמים, עם מזהמים, עם מזהמים, עם מזהמים, עם מזהמים, עם מזהמים, עם מזהמים, עם מזהמים, יש צורך להגן על ידי מזהמים, עם מזהמים, עם מזהמים, עם הדבקה של הדבקה של מזהמים, יש צורך מזהמים, עם

אובדן פיזי במהלך העברה

בכל פעם מדגם מועבר - מן מיכל האיסוף ועד ל vial, במהלך דילול, או לתוך autosampler - יש אובדן פוטנציאלי. in Complete transfer, נוזל חיוור לקירות צינורות, או לכוד אוויר בסירינג יכול להציג inaccuries. Using צינורות חיובי-displaceate עבור דגימות מולקוטוס, לפני צינורות צינורות צינורית, טיפים וטכניקות לצמצום תפקוד גבוה.

הסיבות לזיהום

עקבו אחרי OUTST REST REST REST REST REST REST REST

בסביבות בעלות גבוהה, נושא - שבו כמויות של מדגם קודם נשאר במחיצת autosampler, צ'קוזי או עמודה - הוא מקור מוביל של זיהום.זה מחמיר כאשר ניתוח טווח דינמי רחב, שבו מדגם נמוך ריכוז מסייע לדגימה לאחר מדגם של הדגימה גבוהה.

מנגנונים ב Solvents ו-Reagents

פותרים של Reagent-class מכילים לעתים קרובות ייצובים, מתכות, או מוצרים decomposition שיכולים להפריע chromatography.עבור ניתוח ברמת העקב, HPLC-דרגה או LC-MS-class פותרים הם חובה.גם אז, contamination יכול להתעורר מ-Folizers leaching ממחסנים, נוגדי חמצון מקו הבקבוק, או צינורות מים מדמם תמיד מוכן עם זרם מיקרוסקופי.

זיהום סביבתי מהמעבדה

אוויר מעבדה יכול להציג חלקיקים, phthalates, ו תרכובות אורגניות תנודתיות שעשויות להיות מודעות על משטחים מדגם או להיות מועבר לתוך מערכת ההזרקה.אבק, פתיתי עור, טביעות אצבע הם מקורות משותפים.שימוש בפנסיה ייעודית לדלקת שתן להכנת הדגימה, שמירה על לחץ חיובי בחדרים נקיים, ותחתפות ללא אבקה יכול להפחית את התרומות האלה באופן קבוע ניקוי ולהבטיח כי הם באמצעות דגימות באמצעות חשיפה מיידית לאחר חשיפה.

זיהום ביולוגי

צמיחה מיקרוביאלית בדגימות, במיוחד אלה מאוחסנים בטמפרטורת החדר, יכול לייצר metabolites או לצרוך אנאליס, שינוי הרכב.זה עניין מסוים עבור נוזלים ביולוגיים, תמצית מזון, או מים סביבתיים.הוספת חומרים משמרים כמו נתרן אzide, אחסון ב ⁇ ⁇ C-20, ועובד תחת תנאים סטריליים עבור מזחלות רגישות יכול לעזור לטווח ארוך, עלול להיות יציבות נאותה.

Best Practices for Minimizing Sample Loss

בחירת שימוש וטיפול

הבחירה של חומר vial היא קריטית.FLT:0 עבור לא קוטבי אנאליסלא מרובע 1LT, זכוכית דרך שבילים (borosilicate או soda-לימוזינה) מתאימים בדרך כלל, אבל הם חייבים להיות נקיים, ואם יש צורך, מתמוסס על ידי silanation:2 עבור תרכובות קוטביות 3, פוליפרלן באמצעות יכול לשמש את הפחתת התוספתן או למילוי של חומרת, אך ורקמות, אם אתה יכול להיות מסוגל לבצע את הפחתת הפחתת התוספת גבוהה ביותר עבור קיבולת.

טכניקות הזריקה

ציפוי דיוק ישירות משפיע על אובדן הדגימה. Calibrate צינורות באופן קבוע ולהשתמש נפח בתוך טווח הספציפי של צינורות (למשל, לא בקצה הנמוך הקיצוני של צינורות 100-1000 μLtte) עבור הזריקה לתוך ה chromatograph, טכניקת מילוי חלקי יכול להפחית את הפסולת בהשוואה זריקות לולאה מלאה.

צמצום מספר הצעדים

כל העברה מציגה אפקטים פוטנציאליים אובדן.טכניקות הכנה מדגם Inline, כגון מיצוי חזק (SPE) בשילוב ישירות למערכת LC (ב-SPE), לחסל העברות ביניים. כאשר העברות ידניות הן בלתי נמנעות, להשתמש צינורות לחיקוי חיובי עבור דגימות מולקווס ולעבוד עם משטחים נמוכים של תשומת לב.

ניהול כרך קטן וגורמי דילול גבוהים

כאשר עובדים עם כמויות קטנות מאוד של דגימות (למשל, <10 μL), evaporation ומודעות להיות חמור. השתמש בצריפים נמוכים עם תחתית קונטיבית כדי למקסם את ההתאוששות של נפח קטן. הוסף כמות קטנה של פתרון אורגני (למשל, 10% מלנול במים) כדי להפחית את זווית מגע ולשפר את הצנרת.

אסטרטגיות למניעת זיהום

פרוטוקולי ניקוי קשים

זיהום יכול להיווצר ממעבדות ניתנות להחלפה.עקוב אחר מחזור כביסה קפדני: לשטוף הראשון עם פותר (למשל, אתנול), ולאחר מכן לנקות עם פתרון מרתיע, לשטוף עם מים אולטרה סגול, ולסיים עם שלב מחוספס פתרון. Dedicate זכוכית כדי סוגים אנאליים ספציפיים כדי למנוע עצירות.עבור מערכות דגימה, לקבוע שלב עם מחזור יומי של מחזור ניקוי מוקדם של מחזורי זמן קצר ופרקים.

שימוש ב-High-Purity Solvents ו- Additives

תמיד קוד פותרים עם הרבה מעקבים ותעודות של ניתוח.עבור LC-MS, השימוש מלחי buffer תנודתי (למשל, ammonium formate) עם תוכן מתכת נמוך מומלץ.פילטר כל השלבים הניידים באמצעות 0.2 מיקרומטר membrane כדי להסיר חלקיקים ו- חיידקי.

הפליטה וה Centrifugation

חומר חלקי יכול clog עמודות ו- injector capillaries, המוביל להורדת לחץ וזיהום.תמיד מסנן דגימות באמצעות 0.2 מיקרומטר או 0.45 μm מסנן סינינגה תואם את הממטריקס הדגימה. עם זאת, לציין כי סינון יכול גם להסיר כמה אנאליט באמצעות מודעות על המסנן - או להשתמש מינימלית.

בקרת איכות הסביבה

אבק ואגפים באוויר הם בקלות להתעלם מקורות זיהום.מודלים בחנות במכלים חתומות בתוך desiccators או תאי גז מטוהרים בעת טיפול תרכובות רגישות אווירית.הימנע מאחסון דגימות ליד כימיקלים עם תנודתיות גבוהה (למשל, חומצות, בסיסים, או פותרי תנודתיים). בניתוח עקבות, חדרים ייעודיים (Class או טוב יותר) יכולים להיות מוצדקים עבור ספסלים, או עשן מינימלי.

טכניקות מתקדמות לשיפור הגמישות

הכנת דגימות אוטומטית

אוטומציה מפחיתה את השגיאה האנושית ואת הכדאיות, שיפור הכדאיות.מטפלים בנוזל רובוטיים יכולים לבצע דילוליות, תוספות של סטנדרטים פנימיים, ועיוותים עם דיוק גבוה.הם גם ממזערים חשיפה לדגימה אוויר ומשטחים.עבור LC-MS, פעילות מוצקה באינטרנט (SPE) יכול לטעון, לשטוף, ודגימות אלות ישירות על העמודה אנליטית, צמצום באופן דרסטי של טיפול באוטומציה זו הוא חיובי במיוחד עבור משימות אוטומטיות.

Inert Surfaces and Passivation

בנוסף ציפוי מכולה, את הנתיב הנוזלי כולו של מערכת chromatography ניתן לעבור.טיפול משטחים נירוסטה עם חומצה nitric כביסה (למשל, 50% HNO3 עבור 30 דקות) יוצר שכבת תחמוצת כרום, צמצום משטח מתכת-קטהליוז של ציפוי תרופות אורגני של צינורות.

שימוש בתקנים פנימיים וחוקרים

הדרך הטובה ביותר לפצות על אובדן הדגימה היא להשתמש בסטנדרטים פנימיים (IS) אשר מתווספים לכל דגימה ו calibrator. אידיאלי IS הוא דומה מבחינה כימית ל- אנאליט אבל להבחין (למשל, איזוטופ יציב-labeled) ה- IS עובר את אותה אובדן ומנגנוני זיהום כמו המטרה אנאליט; ההתאוששות שלו מנטרלת את ה-Surgate הסופי.

בקרת איכות ושיטות אימות כדי להבטיח אמינות נתונים

אין קבוצה של שיטות טובות להחליף בקרת איכות פורמלית.כל שיטה chromatographic צריכה לכלול בדיקות התאמת מערכת (למשל, שמירה על זמן דיוק, החזר שטח שיא, והצלחות תיאורטיות) להשתמש תקני בדיקת קלוריות בנמוכה נמוכה, בינונית וריכוזים גבוהים כדי לוודא כי אובדן הדגימה נמצא בתוך גבולות מקובלים (למשל, 80-120% התאוששות).

במהלך אימות השיטה, לערוך מחקרים על יציבות בתנאים מרובים: אחסון לטווח קצר בטמפרטורת החדר, אחסון לטווח ארוך ב -20 מעלות צלזיוס, מחזורי הקפאת שיער, ויציבות לאחר הניתוח.מעד את זמן ההחזקה המקסימלי לדגימות. בדומה, להעריך את ההשפעה של מברשות מטריצה על התאוששות על ידי פיזור כמויות ידועות לתוך מגרות ייצוגיות. השתמש בתוצאות כדי לקבוע קריטריונים לאנליזה מתמשכת.

בתעשיות מוסדרות, בצע הנחיות כגון FLT:0 , FDA Bioanalytical Method אימות GuidanceFLT:1 (קישור ל- FDA) ו-FLT:2ICH Q2(R1) אימות של נוהלים אנליטיים אנליטייםFLT 3: (קישור ל- ICH) דורש תיעוד מדויק של פרוטוקולי טיפול בדגמים וניסויים בשיקום סביבתיים, בדיקות LT4Freave, לעתים קרובות, כדי להבטיח חומרים ספציפיים, כדי להבטיח חומרים מוקדמים, כדי להבטיח חומרים LT5.

בניית תרבות של איכות ב Chromatography

בסופו של דבר, צמצום אובדן הדגימה וזיהום הוא לא אחד זמן רשימת אבל מחויבות מתמשכת.אימון כל אנשי הצוות על עקרונות של שלמות הדגימה, הקמת הליכים תפעוליים ברורים (SOPs), וביצוע ביקורת תקופתית הם הכרחי.לעודד תרבות שבה אנליסטים מרגישים מועצמת לדווח על חריגות, לחקור סיבות שורש, ופרקטיקות. כאשר הדגול הוא נפגע, השתמש בשורש ניתוח (למשל דגים, 5.

על ידי שילוב האסטרטגיות המפורטות כאן - מבחירת מכולות והיערכות אוטומטית לבקרת איכות קפדנית - מעבדות יכולות להשיג את איכות הנתונים ברמה גבוהה הנדרשת על ידי ניתוח מודרני.דגום וזיהום, לאחר שהתקבלה כבלתי נמנעת, ניתן להפחית לרמות רשלנות, לזרז את הדרך לשיפור, ביטחון וציות רגולטוריות יותר.

לקריאה נוספת על שיטות הטובות ביותר, מקורות FLT:0GC על הכנת הדגימה 1 ומאמר FLT:2ACS על מניעת זיהום דגימות בניתוח אורגני FLT 3 לספק תובנות נוספות ומחקרי מקרה.