הבחנה תאית Stem במערכות תרבות היא אבן הפינה של ביולוגיה התפתחותית, מודל מחלה, ורפואה רגנרטיבית.היכולת לכוון תאי גזע בשפע או רב-פוטנטיים לסוגים תאים פונקציונליים ספציפיים מאפשרת לחוקרים ללמוד מנגנונים של מחלה אנושית, תרכובות טיפוליות מסך, ולפתח טיפולים חלופיים תאים.עם זאת, השגת שינוי חזק וחדשני דורש בחירה זהירה של מצבים תרבותיים, איתות שילובים, ואסטרטגיות מיקרו-אוויריות מפורטות, מספק פרוטוקולים מפורטים של בקרה, שיטות בקרה פיזיות, עם שיטות בקרה מפורטות, עם איכות שונות.

שיטות אינדוקציה ביוכימיות

אינדוקציה ביוכימית נותרה הגישה הנפוצה ביותר עבור הנחיה גורל תאי גזע.על ידי הוספת גורמי צמיחה, ציטוקין, או מולקולות קטנות למדיום התרבות, החוקרים לשחזר את אירועי אות הניתוק המתרחשים במהלך התפתחות העוברית.המפתח להצלחה הוא בדיוק התזמון והסרבה של גורמים אלה לחקות חלונות התפתחותיים.

גורמי צמיחה ו Cytokines

גורמי צמיחה כגון חלבונים צמחיים העצם (BMPs), גורמי צמיחה fibroblast (FGFs), ו- Wnt ligands להפעיל קזדיונים ספציפיים אשר מניעים מפרט קופסציה. לדוגמה, מעכב כפול SMAD באמצעות Noggin (a BMP antagonist) ו- SB431542 (a TGF-β/ivin / Noin) הוא פרוטוקול פעולה עצבית של תאי עצב קטנים (Rsomy) עבור דלקת מפרקים מסוג 10) ו-ipip) הוא מעכבים שונים (R2D) ו-Rimcregonipvgic) לאחר מכן) עבור תאים עצביים שונים של תאי עצבנות (Rigicial) ו-Rigine) ו-Rigine) ו-Ripipigine) ו-RTM p.

  • (FLT:0) מחיקה של אורל: FLT:1 כפול מעכב SMAD (Noggin + SB431542) בתשואות בינוניות E6 > 80% PAX6+ כמרים עצביים.
  • (FLT:0)Cardiomyocyte differentiation: FIR99021 (Wnt Activator) ו- IWP-2 (מעכב ונט) ב-RPMI/B27 מדיום מייצר קרדיוציטים מכים עד יום 10-14.
  • (FLT:0) Hepatocyte differentiation:FLT1 Activin A (מפרק מוגן), ואחריו FGF4 ו- BMP2 (המפרט הפטמי), ו- HGF/oncostatin M (הטבעה).

אתגר אחד עם פרוטוקולים מבוססי גורם צמיחה הוא הרבה-על-מנת פנוי, במיוחד עם חלבונים recombinant שמקורם ספקים שונים.שימוש בחלבון מגובש מבחינה כימית או ניסוחים ללא בעלי חיים מפחית השפעות אצווה.

גישות מולקולריות קטנות

מולקולות קטנות מציעות מספר יתרונות על חלבונים recombinant: הם זולים יותר, יציבים יותר וקלים יותר סטנדרטיזציה. חומצה רטינית (RA) היא מולקולה קטנה קלאסית אשר גורמת להפרדה עצבית בריכוזים גבוהים (1-10 μM) ו caudalization של הצינור העצבי.עבור מולקולה עצבית doprgic RAK, שילוב של HH (Gronicgon) pureamine) הוא לעתים קרובות מעכב megside.

  • (ב) [15] ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇
  • (ב) ⁇ (ב"ג): ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇
  • (ב) ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇

פרוטוקולים המשתמשים במולקולות קטנות הם מאוד ניתנים להתחדשות במעבדות, בתנאי שהתרכובות מוכנות טריות ומאוחסנים נכון (למשל, מניות DMSO ב- −80 מעלות צלזיוס) , גם זיהו תרכובות חדשות שקדמות באופן אחר קוויות קשות-לכאורה, כגון oligodenrocytes או cholangiocytes.

המונחים: free and Defined Media

Defined, ללא סרום תקשורת לחסל את ההשפעות של סרום בעלי חיים, המכיל ריכוזים לא ידועים של גורמי צמיחה, הורמונים, ו סוכנים של הפחתה.מדיה מסחרית כמו RPMI / B27 (עבור לב), N2 / B27 (עבור עצבי), או StemPro-34 (עבור hematopoietic) הפכו סטנדרטיים.

  • פרוטוקול Example - אנדודימממבר הסופי:evolveFLT:1 תרבות hPSCs ב RPMI + 100 ng / mL אקטivin A + 0.2% FBS (נמוך) במשך שלושה ימים, הניבה > 90% CXCR4+SOX17+ תאים.
  • פרוטוקול אקסומפלי (FLT:0)Example Protocol - ורדיטים עצביים: VisFLT:1 (KnockOut DMEM/F12 + N2) עם עיכובים כפולים SMAD, ולאחר מכן לעבור ל-N2B27.

החוקרים צריכים לבחון כמה פורמולות ללא סרום קנייני כדי לזהות את זה אשר תומך הטוב ביותר קו היעד, שכן כמה קווי תאים עשויים להופיע אחרת בתקשורת המסחרית.

מטבחים פיזיים ומכניים

המיקרו-סביבון הפיזי משפיע באופן משמעותי על גורל תאי הגזע באמצעות מסלולים mechanotransduction. נוקשות סובסטרטיבית, טופוגרפיה ולחצים של Shear נוזלי להפעיל אותות מתווך וסידורים ציטוסטלים כי מחויבות קו ישיר.

סטיות וטופוגרפיה

תאים Stem לחוש את הגמישות של הצמיחה שלהם substrate באמצעות קידוד מוקד (באופן כללי, מקבילה matrices (0.1-1 kPa) לטובת ניוון ו adipogenic שונה, בעוד substrates קשיח (10–100 kPa) לקדם osteogenesis ו myogenesis. לדוגמה, ג'לים פולי אקרידיד דבק עם קולגן I וכוונון ל- 0.5 ק"מדומים יותר, כמו microternics יותר, 000 קמצמיים אחוריים יותר, או micropatics.

  • (ב) ⁇ (ב"א): ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇
  • (ב) נוקשות בינונית (1-10 kPacio): 1:1 תומך מיוגנזה וכנדרוגנזה.
  • (ב) ⁇ 0 ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇

הידרוג'ל זמין מסחרית (למשל, Matrigel, laminin-111, או hydrogels מבוסס PEG) לספק קשיחות טונהפול.עבור יישומים בעלי טווחי מיקרופלר או נוקשות - לוחיות סיבולת מאפשרות בדיקות מהירות של תנאים מכניים אופטימליים.

כוחות מכניים ו Shear Stress

מתח של חליל, מיושם ביולוגיים או מכשירים מיקרו-השפעהיים, הוא קריטי עבור endothelial ו hematopoietic differentiation. Laminar זרימה (5-15 דינמי /2) upregulates endothelial סמנים כגון CD31 ו- VE-cadherin באמצעות הפעלה של KLF2 ו- eS. Perfusion bioreas גם משפר חמצן והחלפת תפקוד מכני של סגסוגת (Ric IIg) עבור charcrasis 3Dragic.

  • (FLT:0) מחיקה סופית: FIRothelial:FIRLT:1) החל מתח של Shear (10 דינמי / ס"מ2) עבור 48 hPSC-derived mesodermal בערוצי מיקרו-השפעה.
  • (FLT:0) קרדי הזדומנט: 1FLT:1 Cyclic למתוח (10% מתח, 1 הרץ) משפר את ארגון הסרקומב ואת טיפול סידן.

חשמל ומגנטי Stimulation

גירוי חשמלי מחק את הפעילות החשמלית של לב ורקמות המוח.עבור שפיכות לב, החלת שדות חשמליים (- 5 V / ס"מ / סנטימטר, 1 ms הדופק) 1-2 הרץ במהלך שלב ההזדווגות מגביר את הביטוי connexin-43 ו-Synchronizing מכות. עבור הזריקה עצבית, גירוי חשמלי סינוסינרומטי (A, 100Hz) מקדם sneurite החוצה ו-קסיספטימסוג רגיש, או באמצעות צינורות מגנטיים, גם באמצעות , או חומרים מגנטיים.

טכניקות גנטיות ומולקולריות

מניפולציה גנטית מציעה שליטה מדויקת על רשתות גורם ליתוק השולטות זהות התא. בעוד שיטות ביוכימיות מסתמכות על אותות תאיים, גישות גנטיות ישירות כוח או שתיקה ספציפית גנים.המסחר הוא גדל מורכבות ופוטנציאל של השפעות מחוץ ל-target.

המונחים: Lineage-Specific Transcription Factors

ביטוי כפוי של גנים רגולטוריים יכול להמיר ישירות תאי גזע או אפילו תאים סומטיים לתוך סוגים תאים הרצויים. myoD להמיר fibroblasts לתוך שריר השלד; Gata4, Mef2c, ו Tbx5 (GMT) reprogram fibroblasts לתוך לפעום קרדיוציטים; ו- Ascl1, Brn2, ו-Myt1l (AB) לייצר נוירונים עצביים שונים (gic) לתוך תאים דלקתיים (Tgic) לתוך תאים).

  • (FLT:0) נוירונים Ngn2: ⁇ 1) Transduce hPSCs עם מנוף ויראלי t-ON Ngn2 לבנות; להוסיף doxycycline כדי לעורר זרמי זרקור בתוך 48 h.
  • (FLT:0)CRISPRa for Endogenous הפעלה:BuildFLT:1 ; dCas9-VP64 מכוון לקידום NEUROD1 כדי לגרום לגוון תאי הלבלב.

וקטורים ויראליים (lentivirus, AAV) נשארים הכלים היעילים ביותר למשלוח, אבל plasmids אפיזומאל או mRNA סינתטי ניתן להשתמש כדי למנוע שילוב genomic. הבחירה תלויה אם שינוי קבוע מקובל על היישום המיועד.

כלי לוחמה מבוססת CRISPR

CRISPR / CAs9 מאפשר שני גננו דפקו והפעלה / דיכוי (CRISPRa /i) עבור הבחנה, לדפוק רגולטורים שליליים (למשל, Pax7 במוגנזיה) משפר את התשואה.עריכה אפיגנטית - fusing dCas9 לפטוריו (למשל, dCas9-P) או detragicases) יכול להפעיל רצף בטוח יותר, ללא רצף דנ"אורגני, ללא שינוי גנטי בטוח יותר, ללא נזלגן, יכול להפעיל מחדש.

  • (ב) ⁇ (ב) ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇
  • (ב) [15] ,[[1924]]]]]]]], [[1924]]]]]]]], [[1924]]]]]]]]]]]]

שינוי אפיגנטי

ממריצים מולקולה קטנה (Epgenetic Modifiers) - כגון מעכבי הטון (חומצה valproic), מעכבי דנ"א methyltransferase (5-azacydine), או מעכבים טובים יותר (JQ1) - יכולים לשפר את המבדיל על ידי פתיחת chromatin ב קואז ספציפית loci.שלב משככי אפיגנטיים עם רמזים ביוכימיים לעתים קרובות מאיץ על עלייה שונה ושיעור של תאים בוגרים, הם יכולים להיות תופעות לוואי הכרחי.

גישות משולבות ומערכות תרבות מתקדמות

שום שיטה אחת אינה מספיקה לכל הקוות.שלב אסטרטגיות ביוכימיות, פיזיות וגנטימיות סינרגיות משפרות באופן סינרגי את יעילות ההשמדה, בגרות ופונקציונליות.מגמה בתחום היא לקראת תרבויות אגואידיות תלת-ממדיות המבודדות את ארכיטקטורת הרקמות.

3D Organoid Cultures

איברים הם מבנים של 3D עצמיים שמקורם בתאי גזע המחקים את המגוון התאי ואת הארגון התפקודי של איברים בפועל.לדוגמה, איברים במוח נוצרים על ידי הטמעת צ'יפס C מצטברים ב Matrigel וטיפוח ב- ספין ביולוגי עם מעכב כפול של SMAD ו- Wntulation. Intestinal Organs דורשים קוקטייל של WntA, Rpons ו-Rponsindind, הם סובלים מ-Nicestomind, אך ורק מ-R.

  • (ב) ⁇ :0) ⁇ (ב"ד): להוסיף דורסמורפין ו-A83-01 ( מעכבי TGF ⁇ ) כדי לגרום לגורל עצבי; חלק לאחר 30 ימים לאלקטרופיזיולוגיה.
  • (ב) ⁇ :0) ⁇ ⁇ : ⁇ 1 (ב- 4 ימים), לאחר מכן FGF9 ו-Heparin במשך 6 ימים; ליצור מבנים דמויי ערפילית.

⁇ biomaterial Scaffolds

Decellized ממטריקס סלולרי (ECM), פולימרים סינתטיים (PLGA, PEG), ו הידרוג'לים טבעיים (collagen, fibrin) מספקים תמיכה מבנית וסימנים ביוכימיים. Scaffolds עם גודל פוזר מבוקר ושיעורי השפלה ניתן להנדס כדי לספק גורמי צמיחה באופן ספירומנטלי.

בקרת איכות ואימות

ללא קשר לשיטת ההשמדה, אימות קפדני הוא חיוני כדי לאשר זהות תאים, טוהר, ובשלות פונקציונלית. in Complete or off-target differentiation מוביל למסקנות ניסיוניות לא מדויקות.

Flow Cytometry ו- Immunostaining

סמנים אנטיגנים משטח וגורמים ליתעתיקים בתוך תאיים מספקים תמונה של זהות תאים.עבור נוירונים, ביטוי משותף של PAX6 ו- SOX1; עבור קרדיוציטים, cTnT ו NKX2-5; עבור hepatocytes, HNF4α ו- ALB. השתמש במספר סמנים למיזוג ולאגורטים (NCT) כדי לתאים כמותיים (OCTF4GT) כדי לאפשר ל-FCTFCT (O) ל-F4α).

ניתוח פלסטי ופרוטומטי

RNA-seq או qPCR של לוחות גנים ספציפיים (למשל, FLT:0)FOXA2IRFLT 1 עבור אנדודור, FLT:2MYOD1FLT 3FLT 3PLT 3 עבור שריר) מאשר שינויים תמלילים גלובליים. RNA-K-seq יחיד משמש יותר ויותר להעריך את הטרוגניות בתוך אוכלוסיות נפרדות וזיהוי חלבונים נדירים (tragomic Analysis) לאחר הפעלה.

המונחים:

אלקטרופיזיולוגיה (Fch clamp) עבור נוירונים וקליומציטים, הדמיה סידן, ומדידות כוח חוזה הם תקן הזהב עבור הערכה פונקציונלית. עבור תאים אנדוקריניים, פרשת אינסולין ספוגה גלוקוז (GS) אסימונים; עבור hepatocytes, אלבוםן סודיות ו cytochrome P450 פעילות; עבור תאים אנדלוסיאליים, היווצרות כמו צינורות על פני זמן הדבקה עשוי להיות מופעלת, אבל צריך להיות מוקרן על ידי תיבות של זמן סבירים.

בעיות נפוצות

גם עם פרוטוקולים מותאמים אישית, יעילות הזיה יכולה להשתנות עקב הבדלים קו תאים, איכות חוזרת וטכניקת המפעילה.בעיות נפוצות כוללות תשואה נמוכה, זמינות אצווה-ל-batch, ו- off-target differentiation.

חידוש

שמור על בנק תאים עם מספר המעבר המתועד. השתמש במולקולות קטנות (הגנה מפני אור ומקפיא מחזורי) מראש מעיד על הרבה חלבונים או אמצעי תקשורת על קו תאים סטנדרטי. Document the Spec cell confluence בתחילת של הבחנה, כפי שדחיסות משפיעה על אות תא - התא. עבור 2D.i, במטרה להשוואה של 70–90% ביום 0.

Scale-Up

לייצור בקנה מידה גדול (למשל, עבור בדיקת סמים או טיפול), לעבור מתרבות סטטית להשעיה ביולוגיים או מיקרו-קריירים (למשל, Cytodex 3) מכוסה עם laminin או vitronectin תמיכה ב- hPSC הרחבה ו- microcarreactors. Stirred Tanks עם pH מבוקר, חמצן, ותזונה תזונתית מאפשרת פעילות טובה (Gplitex) ממתחת, עם חומרים ביולוגיים (Gacter) שימוש בשרירים).

כיוונים עתידיים

אוטומציה ובדיקות גבוהות של בדיקות חישוב הן פיתוח שיטת מאיץ.פלטפורמות מיקרופלודיות השולטות בדיוק ב ⁇ מדיה מאפשרות בדיקות בו-זמנית של מאות תנאי הזיה. אלגוריתמים של למידת מכונות מוחלים על מנת לחזות שילובים אופטימליים של נתונים דימות תוכן גבוה.

תרופות אישיותיות ייהנו מתאים iPSC-derived מהחולים עם רקע גנטי ספציפי, המאפשרים מודלים למחלות-in-a-dish לגילוי סמים.org-on-a-chip המשלבים מספר רב של איברים עם הפיכה נוזלית ימחיש פיזיולוגיה מערכתית מדויקת יותר.

לבסוף, הפיתוח של מדיה שונה לחלוטין סינתטית, ללא xeno-free וחלבונים recombinant ימשיך להפחית את השימוש במוצר בעלי חיים ולשפר את הבטיחות הקלינית.כפי פרוטוקולים הופכים סטנדרטיים וחזקים יותר, מוצרי תא גזע נגזר יעברו מכלים מחקר לטיפולים תאים מסחריים.

מסקנה

תאים שונים בתרבות דורש תזמורת זהירה של רמזים ביוכימיים, פיזיים וגנטיים המותאמים לסוג תא היעד.אסטרטגיות היעילות ביותר משלבות מדיה מוגדרת עם רצף מדויק של גורמי צמיחה ומולקולות קטנות, אשר מתווספים על ידי גירוי מכני או חשמלי מתאים בעת הצורך. הנדסה גנטית יכולה להאיץ או לשפר את ההבחנה עבור קווי מדידה קשים.

(ב) ◄ [13]

  • (ב) ,0) פרוטוקולי טבע - Stem Cell DifferentiationFLT 1
  • (ב) ,0) ,Stem Cell ReportsFLT:1 - מאמרים מחקר עמיתים על שיטות שונות
  • (ב) ◄ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇
  • (ב) ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇