Strategie per la coltivazione di celle da tessuti incandescenti come Cartilage e Bone

Comprendere le sfide del cartilage e della cultura delle cellule di ossa

I tessuti cartilagine e ossa presentano alcuni degli ostacoli più formidabili nella cultura cellulare primaria a causa delle loro proprietà strutturali e biochimiche uniche. Il cartilagine, in particolare la cartilagine articolare, è avascolare e contiene una popolazione rada di condrociti incorporati in una densa matrice extracellulare (ECM) ricca di collagene tipo II, aggrecan e proteoglygescans.

Strategie per l'isolamento e la cultura delle cellule di successo

Digestione enzimatica

La digestione delle cellule è il 70 % di attività di digestione delle cellule, che si riduce il collagene di una digestione (il 1, II, o una miscela) e il 70 % di attività di digestione delle cellule, il che riduce la digestione delle cellule, il che significa che le cellule disintossicanti e le cellule disfunzioni sono più basse.

Calcolo del tessuto per Bone

Prima della digestione enzimatica, il tessuto osseo deve essere decalcizzato per ammorbidire la matrice minerale. I due approcci principali sono agenti chelanti (ad esempio, EDTA) e acidi (ad esempio, acido cloridrico o formico). L'EDTA a pH neutro è preferito per studi che richiedono elevata viabilità cellulare perché analizza gli ioni di calcio senza danneggiare le proteine cellulari.

Dissociazione meccanica e microdissezione

Per la biopsie molto piccole o quando la digestione enzimatica è poco pratica, si possono usare metodi meccanici. La microdissezione sotto uno stereomicroscopio permette un preciso isolamento delle rasature della cartilagine o delle fiches trabecolari, riducendo al minimo la contaminazione dai tessuti circostanti.

Utilizzo di fattori di crescita e di segnali Molecules

I fattori di espansione non steroidei (BMP-2, BMP-7) e di trasformazione (TGF-β), in particolare TGF-β (TGF-F-β) sono essenziali per la promozione della cogenerazione e dell'ostetogenesi.

Ottimizzazione dei media e dei supplementi di cultura

Per i condrociti, l'alto glucosino Dulbecco ha modificato il mezzo dell'Aquila (DMEM) integrato con GlutaMAX, aminoacidi non essenziali, e il buffer HEPES è comune.

Sistemi di cultura 3D e ponteggi

La cultura monostrato bidimensionale può causare la dedifferenziazione del condrocito (perdita di collagene II e di espressione aggrenica) e l'appiattimento dell'osteoblast. I sistemi tridimensionali meglio imitano il microambiente nativo. Le culture dei pellet (aggregati di cellule concentrate), le culture di micromassanti e l'incapsulamento dell'idrogeno (diato di nuovo, collagene, collagene, collagene, collagene, collagene,

Controllo di qualità e caratterizzazione delle celle isolate

Per i condrociti, i marcatori positivi includono collagene di tipo II, aggrecan, SOX9 e cartilagine proteina di matrice oligomerica (COMP). I marcatori di osteoblasti includono Runx2, osterix, fosfatasi alcalina e osteocalcina.

Pitfalls e risoluzione dei problemi

Diverse problematiche si presentano spesso quando le cellule di culturismo sono causate da cartilagine e osso. La resa delle cellule basse può essere affrontata estendendo il tempo di digestione (entro limiti sicuri), utilizzando l'enzima fresco, o combinando metodi enzimatici ed espianti.

Le direzioni e le tecnologie emergenti

I recenti progressi stanno spingendo i confini di ciò che può essere raggiunto con le popolazioni cellulari scarse dai tessuti scheletrico. La sequenziamento del RNA monocellulare ha rivelato l'eterogeneità inaspettata tra i condrociti e gli osteociti, consentendo strategie di cultura più mirate.

Conclusioni

L'approccio multiforme che rispetta la biologia unica di questi tessuti richiede una selezione accurata dei protocolli di digestione enzimatica, metodi di decalcificazione, cocktail di fattore di crescita e piattaforme culturali migliora notevolmente la resa cellulare e la stabilità fenotipica.

Per i protocolli dettagliati sulla digestione enzimatica, vedere la []Rilevazione dei protocolli di natura[]; per le linee guida dei fattori di crescita, fare riferimento a ]Cellame Traduzionale; e per le tecniche di decalcificazione, consultare Metodi indicizzati[FLT.