Kartilage ve Bone Hücre Kültürü Meydanlarını Anlayın
Kartilage ve kemik dokuları, birincil hücre kültüründeki en çok aranan engellerden bazılarını eşsiz yapısal ve biyokimyasal özellikleri nedeniyle sunar.Stilage, özellikle de artik kartilage, avasküler ve ayrıca, hücreli bir üreme popülasyonu içinde gömülü bir hücreli renografi (ECM) içerir, diğer yandan, hidrojektif kristallerin değerlendirilmesi için mineraller tarafından yapılan bir dokudur.
Başarılı Hücre izolasyonu ve Kültür Kültürü için Stratejiler
Enzymatik Digestion
Yoğun kontraksiyonlardan gelen hücre izolasyonunun temel taşı, iki aşamalı bir sindirime sahiptir: Birincisi, yüzeysel olmayan bir enzimi ortadan kaldırmak için kısa bir tedavi daha iyidir, kalıcı olmayan bir renasyon (4-18 saat) ile birlikte, düşük konsantrasyonlarda (yüzde 10,0-0.2) daha iyi bir vitreat (parçalama veya pronasepiyonel olarak yüksek oranda renasyona kadar) ve kemikten uzaklaştırma işlemi yapılır.
Kemik için baskı
Enzymatik sindirmeden önce, kemik dokusu, mineral matrixini yumuşatmak için elverişli olmalıdır. İki birincil yaklaşım, chelating agents (e.g., EDTA) ve asitler (örneğin, hidroksiklorik veya formik asit) EDTA, nötr pH'da yapılan çalışmalar için tercih edilir, çünkü chelates kalsiyum iyonları daha hücresel proteinler olmadan daha hafiftir.
Mekanik Dissociation ve Microdissection
Çok küçük biyopsiler veya enzymatik sindirmeler, kafa derisi ile kirlenmek, mekanik yöntemler kullanılabilir.Bir stereomikroskop altında Microdissection, eski implant kenarlarından gelen hücrelerin kesin izolasyonu veya trabecular kemik cipsi, saç dökülmesi ile azaltım 7-14 gün boyunca mekanik dispozisyonlar da hücre kurtarma, özellikle de biyosör büyüme veya daha az önce, özellikle de kardiyolojik tedavilere yerleştirilebilen küçük eksperasyonlar ile birleştirilebilir.
Büyüme Faktörleri Kullanımı ve Molecules
Bir kez izole edildi, korondrositler ve osteoblastlar, özellikle de proliferasyona özel büyüme faktörü takviyesi gerektirir ve farmakogenetik proteinlerini (BMP-2, BMP-7) ve büyüme Faktörünü Dönüştürmek (IGF ⁇ 1 ve TGF ⁇ 3, özellikle de profeksiyon ve osteogenezleri teşvik etmek için önemlidir (FGFoblastik büyüme faktörü-) Fibroblast büyüme faktörü-z.
Kültür Medyasını ve Tamamlarını İyileştirmek
Hücre kültürü orta seçimi doğrudan hücre davranışını etkiler.In chondrosits, yüksek gkcose Dulbecco'nin Modified Eagle Medium (DMEM) GlutaMAX ile takviye edilir, non-esential amino asitler ve HEPES tamponu, ⁇ MEM veya DMEM'de mineralizasyonun daha sonra ortaya konması durumunda, anti-poksitoksitiyodüllü örneklerin geliştirilmesi için% 20 serum kullanır.
3D Kültür Sistemleri ve Scaffolds
İki boyutlu monokat kültürü korondrosit defarklılık (köpek II ve aggrecan ifadesi) ve osteoblast düzleştirici. Üç boyutlu sistemler daha iyi taklit edici kültürler (ortalamalı hücreli) mikrokriptolar ve hidrojektifler için daha fazla matrisler ve hücreli otlar geliştirmeleri için kullanılır.
Kalite Kontrol ve Tanımlanmış Hücrelerin Karakterizasyonu
Özellik ve kültürden sonra, hücre kimliğini ve saflığı doğrulamak zorunludur. chondrosits için pozitif işaretler, kolajen tip II, aggrecan, SOX9 ve kartilage oligomeric matrisler protein (COMP) Osteoblast işaretleyicileri Runx2, osterix, alkalin sphatase ve osteokalsin ek olarak uzun süreli işlevsel olmayan bir farklar için - standart yöntemler.
Ortak Pitfalls ve Sorun Gidering
Çeşitli konular sık sık sık kartilasyon ve kemikten hücreler yetiştirmede ortaya çıkar.ETHFLT:0) Düşük hücreli redüksiyonu[Döneticileri) özellikle cerrahi örnekleri ile çalışırken, iyileştirici ve eksperatif yöntemler kullanarak 3 tirazinler.
Future rotası ve Gelişen Teknolojiler
Son gelişmeler, multipl hücre tiplerini entegre eden, hücreli hücreli hücrelerin sınırlarını zorlar ve osteogenetikleri arasındaki beklenmedik heterojenliği ortaya koyar.Geçmiş kültür stratejileri. Organoid ve mikro-toku modelleri, multipl hücre tiplerini entegre eden modeller (kondrositler, osiloblastlar, endotel hücreleri) korelasyonlar, korelasyonelasyonlar ve kemik onarımı için çok sayıda genetik teoriye karşı koymak için daha fazla kanıtlanabilir.
Sonuç Sonuç Sonuç Sonuç Sonuç Sonuç Sonuç Sonuç
Otomobil ve kemikten gelen başarılı kök hücreler, hücre verimini ve phenotypopic stabilitesini önemli ölçüde geliştirir.Bu tür dokulara saygı duyan hücrelerin gerçek ve işlevsel olmasını sağlar.Bu stratejileri benimsemeye yardımcı olur, araştırmacılar yenidenjeneratif tıp, ilaç testlerini ve temel akıl dışı hastalıkları geliştirmek için iskeletsel hücre modellerini açabilirler.
Enzymatik sindirme ile ilgili ayrıntılı protokoller için, bkz.Dörtüncü Doğa Protokolleri[Döneticileri: 1) Maddeler; büyüme faktörü yönergeleri için, [[Şeref Hücreleri Çeviri Tıp[DÜyetim Yöntemleri, Tavsiye Edilen Yöntemler[Dönlendirilmiş Yöntemler).