Hücre kültürü laboratuvarlarında sterilliği korumak, deneysel sonuçların yeniden tanımlanması ve geçerliliği temeldir. Contaminasyon olayları, bakteri, fungal, mycoplasmal veya çapraz-cellular, çalışma süresinden geçersizdir, pahalı reaktifler ve uzlaşma verileri bütünlüğü sağlar.Bu makale, her türlü hijyen krizinden korunma ve tedavi etkilerini ayırt etmek için dramatik bir şekilde kanıtlanabilir.

Hücre Kültüründe Kirlenmenin Kaynakları

Kirişçilerin nereden geldiğini anlamak, önlemeye yönelik ilk adımdır. birincil kaynaklar birkaç kategoriye girer:

Personel Personel

İnsanlar, kontrasesyonun en yaygın vektörüdür. Skin flakes, solunum damlacıkları ve saç dökmesi iş alanına bakteri ve mantarlar taşıyabilir.Bir kültür kapına tek bir el dokunur.[DÜye ait:0) ve steril eldivenler kullanımı bu riski azaltamaz, ancak tamamen ortadan kaldırırlar.

Çevre ve Hava Kalitesi

Laboratuvar havası mikropiyal sporlar dahil olmak üzere askıya alınmış parçacıklar içeriyor. Hücre kültürü çalışması, sertifikalı bir şekilde yapılmalıdır:0).Klasik II Biyogüvenlik Kabini (BSC)), HEPA-filtre duvarlarına göre, sularda su tasarrufu ve ekipmana bağlı olarak bile uzlaşmak zorunda kalıyor.

Malzemeler ve Reagents

Kültür medyası, sera, denemeler ve antibiyotikler üretim sırasında kirlenebilir, depolama veya kullanım sırasında enfekte olabilir. ticari medya sterilleştirilebilir, uygunsuz depolama - şişeleri terk etmek veya geçmiş son sona ermek gibi - mikrobiyolojiye izin verebilir.)

Hücre Hatları Themselves

Contamination aynı zamanda hücre hattı ile de tanıtılabilir. Mycoplasma en çok şüpheli kirleticidir, çünkü hücre hatları arasında görünür bir türlük veya pH değişikliği üretemez. Araştırmalar, [[ŞUygunT:0)

“Mycoplasma kirliliği, gen ekspresi, metabolizma ve uyuşturuculara yanıt dahil olmak üzere neredeyse her hücresel parametreyi değiştirebilir.Her gelen hücre hattını ve rutin olarak daha sonra gerekli olan cevabı test edin.” – Corning Hücre Kültürü Kılavuzu[[DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD)

Steriliteyi korumak için temel uygulamalar

Sertifikalı bir Biyogüvenlik Kabininde Çalışın (BSC)

BSC, steril hücre kültürü için en önemli ekipman parçası. Bu, hem operatör hem de kültürleri koruyan tek yönlü, HEPA filtreli bir hava akışı sağlar. Hücre kültürü çalışması için, aİLFLT:0Class II, Type A2)

  • [FONT=0)Certification and maintenance:[Dönetici:0) BSC sertifikalı yıllık (veya daha sık) kalifiye bir teknisyen tarafından sertifikalandırılmalıdır.Hava akışı alarmı ve HEPA filtre bütünlüğü kontrol edin.
  • [FONT:0)Proper kullanımı: [Dönetici: [Dönder: 0,3] Doğru yüksekliğe sash tutun. Ön veya arka ızgaraları engellemeden önce tüm eşyaları kabin içinde çalışmaya başlamadan önce yerleştirin - hava akışı kuruldu, steril alanı bozabilecek hızlı silah hareketlerinden kaçın.
  • [FONT:0)Loading ve yüklenme: Tüm eşyaları (orta şişeler, boru parçaları, flasks) BSC'ye girmeden önce% 70 ol ile ayır.
  • [FONT=0) <24|x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x

El Hijyeni ve Kişisel Koruma Ekipmanı

BSC ile bile, operatörün elleri birincil bir konsensiyon kaynağıdır.ETHFLT:0)Seks eller iyice [Dönetici 1) hücre kültürü alanına girmeden önce antimik sabunla birlikte. Tozsuz nitri veya geçx eldivenleri giymek, onları% 70 eh etanol ile sprey ve hava ısıtmaya izin vermek; periyodik olarak tekrarlamak.

  • [FONT:0]Glove değişiklikleri:[Dönetici:[Dönetici:0) Değişim eldivenleri hemen herhangi bir şeye dokunurlarsa hemen bir medya şişesinin dışında, bir sandalyenin kolrestu, bir kapık, ya da yüzünüz.
  • [FONT:0)Lab ceketleri:[Dönetici:[Dönetici:0)) Sadece hücre kültürü paketinde kullanılan özel bir laboratuvar ceketi giymek.
  • [FONT:0)Face maskeleri ve saç kapakları: Bir cerrahi maske, damlaları azaltır ve saç telleri veya bouffant kapaklar, yüksek çözünürlük çalışmasına düşmelerini engeller. (örneğin, birincil hücreler veya hücreler klinik kullanım için), tam yüz koruyucu uygun olabilir.

Sterile Ekipman ve Malzeme

Kültür veya medya ile iletişim kurmak için gelen her öğe steril olmalıdır. Bu, borular, borular, acılar, sentler ve ağlamak, sadece 20 dakika boyunca otomatik olarak kullanılabilir.(0)) Kurunlanmış sterilleştirme (Düzücük camlar için, yeniden kullanılabilir camlar için, barlar veya çubuklar gibi, en az 12 °C'ye dayanamaz.

  • [FONT:0]Media ve takviyeleri: [Dönetici: [Dönetici:0]Sıcak ısıtıcı bileşenleri (örneğin, antibiyotikler, vitaminler, büyüme faktörleri) 0.22 ⁇ m filtresi aracılığıyla filtrelemek için kullanılır. Pre-warmed medyası hemen kullanılmalıdır ve uzun süre boyunca 37°C'de bırakılmamalıdır.
  • [FONT:0)Su:[Dönetici için, hücre kültürü için sadece USP-grad suyu veya su kullanın ve sonra sterilleştirilmiş sulardan kaçının, bu da endotoksinleri tanıtabilir.
  • [FONT:0)Incubator yönetimi: [Dönetici: [Dönetici:0] Temiz incubatörler düzenli olarak – zenfekte edici (örneğin,% 70 tanol veya bir kuternary ammonium bileşik) ile raflar ve su pansları.

Açık Kültür Gemilerini Minik

Her an bir kültür gemisi açık, hassastır.(BSC yüzeyinden aşağıya doğru ayarlanmamış), cam şişelerin boynunu (eğer camları kullanarak) ve flasks kapatabileceğiniz hızlı, pürüzsüz bir hareket kullanabilirsiniz.

  • [FONT:0]Çözler halinde çalışmak:[Döneticileri işlemediğinde, işinizi durdurursunuz, böylece asla aynı anda birkaç açık flasks asla.
  • [FONT:0)Pipetting:[Dönetici:[Dönetici:0) Her sıvı transfer için ayrı bir steril borulu kullanın. asla aynı boruyu bir kültüre ayırmayın ve sonra bir medya stoğuna geri dönün.
  • [FONT:0) antibiyotiklerin kullanımı:[Dönetici:[Dönetici:0)Düzücükler:0) antibiyotiklerin kullanımı:[Dönetici:0)) Penisilin-streptin veya gentamikin bazı bakteri kirleticileri bastırabilir, mycozopzumu veya mantarları öldürmez. antibiyotiklerin aşırı dozda aşırı derecede düşük seviyeli bir kirlenmeye neden olabilir.En iyi uygulama rutin kültür için antibiyotik olmadan çalışmak ve steril teknike güvenmektedir.

Disinfect Work Surfaces and Equipment

Her çalışma oturumundan önce, tüm yüzeyler BSC'de dezenfekte edici bir şekilde temizlenir.:0)% 70 etanol[Dönetici: 1) En yaygın seçimdir, çünkü birçok bakteri ve virüslere karşı etkilidir. Ancak, daha derin bir dekontaminasyon için, bir sporsel dezenfekte edici dezenfekte edici (örneğin,% 10 sülerek,% 10 sülerek, sonra da, birçok bakteri ve virüslere karşı etkili değildir.

  • DÖRT:0) Hafta derin temizlik: [Dönetici: [Dönetici: 0,2] Bir hafta içinde tüm eşyaları BSC'den çıkarın ve bir sporidal temizleyici ile iyice temizleyin, sonra% 70 eh.
  • BSC'nin üst kısmından: [Dönetici: [Döntilmiş tezgahlar, incubator işliyor, mikroskop parçaları ve bilgisayar klavyeleri düzenli olarak.Bu yüksek uçlu yüzeyler kirleticiler için sık sık rezervuarlar.

Uzun Süreli Sterilite için En İyi Uygulamaları Genişledi

Laboratuvar Tasarımı ve İş Akışı

Hücre kültürünün fiziksel düzeni ya da sterilliği engelleyebilir. İdeal olarak, laboratuvarın, odadaki havalandırma sistemlerindeki genel mikrobiyoloji veya moleküler biyoloji alanlarındaki özel bir “temiz” alanı olması gerekir.

  • [FONT:0)Oda trafiği:[Dönetici:[Dönetici:0)))Eğitim personeline erişim sadece bir yürüyüş veya depolama alanı olarak hücre kültürünü kullanma.Bir işaret dışarı: “Cell Culture Lab – Yetkili bir Personel Sadece - Soğuk veya Taze Yararınız varsa girmeyin.”
  • [FONT:0) Temiz ve kirli akışlar: İdeal olarak, giriş için “temiz koridor” (gowning, steril malzemeleri depolama) ve birçok tesiste lüks olmasına rağmen, sadece laboratuvarda temiz bir tezgah tasarlamak ve bir atık tutma aracı yardımcı olabilir.

Contamination için izleme ve test

Routine izleme önemlidir, görünür bir kirlenme olmadığı zaman bile. Hücre kültürü laboratuvarları aşağıdaki bir kirlenme izleme planına sahip olmalıdır:

  • [FONT:0]Mycomixa testi:[Dönetici: 1 ) Benimlerleyici veya kültür temelli yöntemleri kullanarak, tüm yeni hücre hatlarının makbul edilmesi ve test edilmiş kültürlerin aylık olarak test edilmesi.
  • [FONT:0)Bacterial ve fungal tarama: Kültür süpernatant (veya harcanan orta) küçük bir alıntı (veya harcanan orta) 30-37°C'de reyote ve thilycollate orta.
  • [FONT:0]Surface örneği:[Dönetici:[Dönetici:0) Swab BSC yüzeyleri, incubator içleri ve steril bir pamuk kıpırlasıyla üstler, sonra kan agar plakaları üzerine çizin.Subate ve kolon-formasyon birimleri temizleme rejiminizin etkinliğini izlemek için.
  • [FONT:0) Hava kalitesi testi:[Dönetici:[Dönetici:0) Hava kalitesi testi:[Dönetici:[Dönetici:0)) BSC içinde ve 1-4 saat boyunca odada kalan plakaları (örneğin, birgar ile açık petri yemekleri) kullanın.

Suspected Contamination

En iyi çabalara rağmen, kirlenme hala gerçekleşebilir. Act hızla:

  1. [FONT:0] Gemiyi terk ediyorum:[Dönetici:[Dönetici:0) Konfeksiyon kültürünü diğer kültürlerden uzak bir yarıda hareket ettirin.
  2. [FONT=0]İdentify the kirletici:[Dönetici: 0) Mikroscopy ile morfolojiyi (bakteriya çubuklar veya kocci olabilir; mantarlar gerekliyse Gram bir leke yapar.
  3. [FONT:0) Selam (eğer kritikse): ) Benimlem için, doğrulama rejimleri (örneğin BM-Cyclin veya Plasmocin ile tedavi) kullanır.
  4. [FONT:0) BSC ve ekipmanlarını yeniden ele alalım: Kabini, incubatoru tamamen temizlemek için bir spor veya beyaz kullanın ve maruz kalan herhangi bir eşya.
  5. [FONT:0) Olayı garanti eder:[Dönetici:0) Ne olduğunu kaydedin, büyük kaynak ve doğru eylemler alındı. Bu bilgiyi protokolleri geliştirmek için kullanın.

Asepsis'in eğitim ve kültürü

Hücre kültürü laboratuvarındaki en pahalı ekipman, operatörün tekniğinin fakir olup olmadığı konusunda işe yarar. [0]İnisal ve devam eden eğitim) kritiktir. Yeni personel, vahşi kültürlerin yerine (yaşam kültürleri yerine) gözlemlenmeli.

  • [FONT=0]Drills ve denetimler: Reptik asptik teknik denetimler –örneğin, deneyimli bir teknoloji her adım (El yıkama, BSC yükleme, boru hattı, kapatma gemileri) bir tren izleme ve puan aldı.
  • [FONT:0)Checklists:[Döneticiler:[Döneticiler:[Döneticiler:)))))) Bir günlük kontrol listesi oluşturun: “Başlangıçtan önce BSC'yi temizledim mi? eldivenler dezenfekte edildi? kültürler getirenden önce BSC'ye yerleştirilen tüm öğeler mi?
  • [FONT=0)Açık kitap rehberliği:[Dönetici:[Dönetici:0)[değiştir | kaynağı değiştir], eller, etan sprey, yük malzemeleri, açık gemi, transfer, yakın gemi, temiz, temiz.

Temel Hücreler ve Stem Hücreleri için özel düşünceler

Temel hücreler (örneğin, insan fibroblasts, her zamanatosits) ve indüklenen pluripotent kök hücreler (iPSC) genellikle daha hassastır ve birincil kültürler için daha yaygındır, ancak sadece geçici olarak -daha iyi büyüyen doku örneklerinden kaynaklanmaktadır. iPSCs için, günlük medya değişikliklerinden kaçınır.

Aubator Hijyen ve Gaz Supply

İncubator, su panını endüstriyel olarak temizleyen ve beton su panını kullanan ve bakır su bardağını kullanarak (p) mikrobiyal büyümeyi engellemek için (profesyonel olmayan gaz malzemeleri için, su bardağı yıkamak için, presler veya borular) bir bakır yağ filtrelerini kullanın.

Sonuç Sonuç Sonuç Sonuç Sonuç Sonuç Sonuç Sonuç

Hücre kültürüne uygulanan enjeksiyon, her aşamada ayrıntılı olarak dikkat gerektiren sürekli bir disiplindir - laboratuvarın mimari tasarımı ve hava kalitesinden operatörün günlük el yıkama ve son imha edilen biyogüvenliklerin maliyetine kadar, tekrarlama veya daha kötü, yayıncılık sonuçlarını tanımlamak için, araştırmayı uygulamak için, araştırmacıların değerli kültürleri kaybetme riskini dramatik bir şekilde azaltabilirler.