İlaçlarda İnce-Layer Kromatografiye Giriş

İnce-katılım korromatografi (TLC) dünya çapında farmasötik laboratuvarlarda en yaygın kullanılan kromatografik tekniklerden biri olarak kalır.En basit, düşük maliyet ve hızlı dönüş, özellikle de kaliteli kontrol ve yöntem geliştirme ayarları için vazgeçilmez hale getirir.Bu kapsamlı kılavuzda, ilaç analizleri için TLC'nin tekniklerini, prensiplerini ve pratik uygulamalarını keşfederiz, ilaç bileşiklerinin güvenilir bir şekilde ayrılması ve tanımlanmasını sağlar.

TLC, 20. yüzyılın başlarından itibaren önemli ölçüde gelişti. Bugün, yüksek performanslı varyantlar (HPTLC), endokometrik tarayıcılar ve biyokütleli uygulamaları izlemek için sayısal bir yöntem getiren otomatik örnek uygulamacılara hizmet vermektedir.

TLC'nin Temel Prensipleri

Onun özünde, TLC, bir istasyoner aşaması ve mobil bir faz arasındaki bileşiklerin ayırıcı göçüne dayanıyor. Daha sonra, gelişmiş bir çözücü (daha yavaş bir şekilde silik jeli, ışıklı eylem, ya da camlı-suçlu bir şekilde sabitlenir - örnekleme bileşenleri farklı oranlarda taşımaya bağlıdır.

Bu boyutsız miktar sabit bir aşamadaki temel standartların, mobil faz, sıcaklık ve nemin belirlenmesi için gereklidir, ancak bunlar mutlak değil - deneysel parametrelerdeki değişimler onları değiştirebilir.Bu nedenle, sabit koşullar altında bir bileşik özelliği standart uygulama aynı plaka üzerinde de geçerlidir.

İstasyon ve Mobile Fazlar

İstasyonları

Silica jel (silica jel 60 F254 en yaygın) normal-faydalı TLC'nin çalışmalarından biridir. Farklı seçici olmayan maddeler için kutuplu, kutuplu bileşiklere ayırmak için idealdir (örneğin, C18 veya C8), hidrobik olmayan bileşiklerin analizine izin verilir.

Özel plakalar, bu yanlış anlamayı fluorsan göstergesi (F254) UV görselleştirmesi veya metal iyon analizi için chelating ajanlarla içerir. İstasyon aşamasının seçimi, mobil fazın kutupsallığını ve doğrudan etkiler seçiciliği belirtir.

Mobile Phases

Mobil aşama seçimi, TLC yöntemi geliştirmedeki en kritik adımdır. Normal-fayda TLC için, çözücü sistemi genellikle düşük çözünürlükte bir çözücü (örneğin, hexane, toluene) ile daha kutup değiştiricisi (örneğin, ethyl acetate, mol veya glacial acetik asit) arasındaki orantılı Rf değerleri gösterir.

Ortak mobil aşama stratejileri, ternary karışımları (örneğin, toluene:ethyl acetate:acetic asit) karmaşık karışımların çözümü için geliştirilmiş olan karmaşık karışımların çözümü için. "PRISMA" modeli veya istatistiksel deneysel tasarım, kompozisyonu verimli bir şekilde optimize edebilir. Oda, kenar etkilerinden kaçınmak için önce çözünen buharlarla doymalıdır ve tutarlı Rf değerleri sağlamak için doymalıdır.

TLC için araç ve malzeme

Plakları ve büyücüler

Ticari pre-koated TLC plakaları çeşitli boyutlarda mevcuttur (tipik olarak 20 × 20 cm, 10 × 10 cm veya 10 × 20 cm) ve hidroksit kalınlıkları (0.2-5 mm standart TLC için 0.1-0.2 mm) İlaç analizinde, HPTLC plakaları daha küçük parçacık büyüklüğü (5-6 μm) daha iyi bir karar ve algılama sağlar ve HPLC'ye yaklaşabilir.

Geliştirme Odası

TLC odası, plakayı çözücüye veya duvarlarına dokunmadan sıkıca mühürlenmiş ve büyük olmalıdır. Linear geliştirme (ascending) standarttır. tersinen-faz plakaları için, oda genellikle filtre kağıdı ile birlikte taşınabilir faz buharları ile doygundur.

Örnek Uygulama ve Densitometri

Mikrobortte veya capillary tüpü ile ayarlanması hala yaygındır, ancak otomatik uygulamacılar (örneğin, Camag Linomat veya ATS) sayısal iş için büyük ölçüde hassastır. Örnek, vanil-sulfurik asit veya ninhydrin altında görselleştirmek için bir nokta olarak uygulanır.

Sayısal analiz için, bir dezenometre plakayı belirli bir dalga boyunda tarar, HPLCT gibi kaynaklarla lineer olarak ilişkili olan fluorescence yoğunluğunu ölçür.Modern TLC tarayıcıları, belirli bir yazılım ile eşleştirilmiş ve doğrulama, üst alan entegrasyonu ile sonuç rapor eder ve birçok uygulama için HPLC ile karşılaştırılır. Dış bağlantılar:0Camag HPTLC Kaynak Merkezi) gibi kaynaklarla ilgili ayrıntılı protokoller ve doğrulama sağlar.

Yöntem Geliştirme ve Optimizasyon

Sağlam bir TLC yöntemi, sabit fazın sistematik taramasını, mobil faz kompozisyonunu, örnek yükleme ve geliştirme koşullarını içerir. genel normal bir fazlı sistemle başlayın (örneğin, kontrütle 60 F254 ile eethyl acetate:hexane karışımları) ve kutupluluğu ayarlamalıdır.Eğer karar verme sistemi tam olarak Rztic asit (asterik bileşikler için) veya tribütlü (aslı bileşikler için) gibi bir modlamayı doğrulayın.

Anahtar optimizasyon parametreleri:

  • [FONT=0) Solvent gücü[[Dönetici: kutup çözücü oranı normal aşama için saklamayı azaltmaktadır.
  • [FONT:0) Seçicilik[Dönetici: Mobil fazın kimyasal doğasını değiştirmek (örneğin, ethyl acetate to acetone or tetrahidropan) ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrı ayrılığa yol açabilir.
  • [FONT:0]Chamber saturation[[Dönetici: En az 15–30 dakika boyunca odayı plakadan silüverme sağlamak için.
  • [FONT=0]Temperature ve nem[Dönem: Kontrol sıcaklığı ±2°C ve en iyirod repucability için aşağıdaki% 60'ın altındaki göreceli nem. Mağaza plakaları bir desiccator.
  • [FONT:0)Sample konsantrasyon[[[Döntme: 1): Çok fazla örnek kuyruk veya aşırı yüklemeye yol açar; tipik yükleme analitik TLC için 0.1-10 μg.

İyi optimize edilmiş bir yöntem simetrik, iyi ayrılmış bölgeler minimum kuyruk ile elde etmelidir. Sistem uygunluk testi genellikle, bitişik zirveler arasındaki kararın en az 1.5 olması ve hedef bileşik Rf standart ±0.05 oranında düşmesi gerekir.

Qualitative and Quantitative Analysis

Qualiteative Identity

İlaç analizinde, TLC sıklıkla çiğ malzemelerin kimlik testleri için kullanılır ve bitmiş ürünlerdir. analist Rf değerini ve spot rengini karşılaştırır ( UV veya tonlama sonrası) test örneği ile aynı plakada bulunabilir.Bu teknik birçok hesaplamada resmidir: örneğin, ABD Pharmacopeia (USP) her ilaç için TLC kimlik testleri içerir.

Densitometri tarafından sayısal analiz

Quantitative TLC (en azından HPTLC olarak anılır) plakayı bir kromatogram oluşturmak için bir kontraksiyonu ile taranır. Yöntem, birkaç mikrograma kadar genellikle nanogramlardan gelen bir dizi boyunca doğrusal bir şekilde yapılır.

Sayısal TLC için geçerlilik parametreleri belirli bir yöntem, lineerlik, hassasiyet (önetici ve orta hassasiyet), algılama limiti (LOD), ve ölçüm limitleri (LOQ) ICH yönergelerine göre, LOD ve LOQ, belirli bir yöntem için en uygun şekilde belirlenmelidir.

Tipik konsensiyonel koşulların bir masası bu şekilde görünebilir ( HTML’de, aritFLT:0) ama talimat tabloların açıkça izin vermediğini; ancak tablolar HTML'de iyi olacaktır.

Typical Densitometric Parameters for HPTLC Quantitative Analysis
ParameterSetting
Wavelength254 nm (absorption) or 366 nm (fluorescence)
Slit dimensions4 mm × 0.3 mm
Scanning speed20 mm/s
Data resolution100 µm
Calibration modeLinear regression or polynomial (second order)

İlaç Analizi Uygulamaları

Kimlik Testi ve Saflık

TLC, bir API veya eksternal tespit edilen ürünlerin kimliğini doğrulamak için ilk satır yöntemidir. Örneğin, pasepiyonel testlerin Rf ve spot görünümünü standart bir şekilde karşılaştırması gerektiğini belirtir.For saf değerlendirme için TLC, ilgili maddeleri ve bozulma ürünlerini seçici tespit edebilir.ForC, psiyonel tespit edilen TLC tarafından yapılan birçok farmakoesans testi, formun mobil aşaması ile 60 F254'ü kullanır.

Stability Studies and Degradation Watch

Güçlendirme çalışmaları (stres testi) ısı, ışık, nem ve xidasyon, ebeveyn ilacından ayrı olması gereken bozulma ürünleri oluşturur. TLC genellikle genişletilmiş HPLC yöntemi geliştirmeden önce hızlı bir şekilde gerçekleştirilen bir teknik olarak kullanılır.Tek bir plakada birden fazla örnek çalıştırma yeteneği, birçok zaman noktası test edilen assays için verimli hale getirir.

Synthesis'de Reaksiyon İzleme

İlaç sentezleri sırasında TLC, tepki hızının belirlenmesi için tercih edilen yöntemdir.Rektör karışımlarının küçük bir kısmı geri alınabilir, bir TLC plakasında tespit edilir ve dakika içinde gelişmiştir. Ürün noktalarının görünümü ve başlangıç malzeme lekelerinin ortadan kaybolması, kimyayı tamlık belirlemede yardımcı olur.

Herbal Drug Analysis ve Counterfeit Tespit

TLC parmak izi, bitkisel ilaçların kimlik doğrulaması ve yetişkinlerin tespiti için yaygın olarak kullanılır. UV altında ve türetme sırasındaki karakteristik bir dizi nokta sahte ilaç taraması için basit olan bir botanical kimlik sunar. Benzer şekilde, TLC hızla sahte farmasötik ürünler tespit edebilir:0.

Avantajları ve Sınırlamaları

Avantajları Avantajları Avantajları Avantajları

  • [Düzükler düşük maliyete göre [Dönemli: Minimal termik tüketimi (10-50 mL çalıştırılan) ve HPLC sütunları ve pompalarla kıyasla ucuz malzemeler.
  • [FONT:0)Speed): Tipik bir TLC gelişimi 15–60 dakika sürer; birden çok örnek aynı anda bir plakada çalıştırılabilir.
  • [FONT=0)Versattitude): Kromozom olmadan, transkriptoforlar dahil olmak üzere geniş bir dizi uygunsuz ve yarı-volatile bileşik analiz etmek için bir kolaylık.
  • [FONT:0]Parallel analizi[[Dönem: 20 veya daha fazla örnek, tek bir 20 × 20 cm plaka üzerinde çalıştırılabilir, bağlantı yoluyla geliştirmek.
  • [FONT:0]Visual record[[[Dönemli kayıt[[Dönemli:0)[Dön kayıt[[Dönemli kayıt)[[[Dönemli: gelişmiş plaka, analizin kalıcı bir kaydı olarak depolanabilir, belgeleme ve denetim için kullanışlı.

Sınırlamalar

  • [FONT:0]Lower kararı[[Dönem: TLC genellikle HPLC ile kıyasla daha düşük teorik plakalar (birkaç bin) sağlar ve birçok bileşenle karmaşık karışımları ayırma yeteneği kısıtlanır.
  • [[Düzücü hassaslık[Dönetici: 1)[Dönetici: Kılavuz lekeleme ve gelişim değişkenliği hataları tanıtabilir. Otomatik sistemler hassas ama maliyet artışı sağlar.
  • [FONT=0)Deteksiyon sınırları[[Dönetici: Detection sınırları[Dönetici 1 ): Risometri ile bile, algılama sınırları genellikle HPLC veya LC-MS'den daha yüksek (μg aralığı)dir (ng aralığı).
  • [FONT=0]Limited lineer dinamik aralığı[[Dönetici: Rejim ilişkisi sadece iki boyutta doğrusaldır, nice örnek dillemleri ölçmek için gereklidir.
  • [FONT:0)Operator bağımlılık[[Dönetici: 1): Reproducability ağır bir teknike bağlıdır - nokta büyüklüğü, pozisyon, oda koşulları ve gelişim zamanlamasına dayanır.

Diğer Kromatografik Tekniklerle Karşılaştırma

TLC vs. HPLC

Yüksek performanslı sıvı kromatografi (HPLC), rutin sayısal analiz için üstün bir karar, hassasiyet ve otomasyon sunar. Bununla birlikte, TLC genellikle ilk yöntem için daha hızlıdır ve paralel örnek analizi gerektirir.To farmasötik kalite kontrolü için hızlı bir kimlik kontrolü yeterli olduğunda, TLC genellikle tercih edilir.

TLC vs. Gas Chromatography (GC)

GC, uçucu ve termal olarak stabil bileşiklerle sınırlıdır; TLC, uçucu karışımlar için son derece yüksek çözünürlükte bulunabilir ve kesin bir tanımlama için topikal maddeler ile birleştirilir. Örneğin, TLC birçok antibiyotik, steroidler ve GC enjekte eden bitkisel ekstralar için tercih edilir. Conversely, GC, uçucu karışımlar için son derece yüksek çözünürlük sunar ve kesin bir tanımlama için kütle spektrometri ile bir araya gelir.

Sonuç Sonuç Sonuç Sonuç Sonuç Sonuç Sonuç Sonuç

İnce-katılım koreografisi farmasötik analistin araç kutusunda önemli bir araç olarak kalır. Hızlı, maliyet-aktif bileşik tanımlama, saf değerlendirme, reaksiyon izleme ve kararlılık testleri sağlarken, analistler, ilaç gelişimini ve yasal uyum sağlamayı sağlar.For understand the Principles ofstation Selection and mobile stage testing, develop recovery of development conditions, and appropriate denometrik tarama, analistler HPLC or GC'yi güvenilir ve geri dönüşümlü sonuçlar elde edemezler.