درک چالش های بیماری های کارلک و فرهنگ سلول های استخوان

بافت های کار و استخوان برخی از موانع گرانبها در فرهنگ سلول های اولیه را به دلیل خواص منحصر به فرد ساختاری و بیوشیمیایی خود، Cartilage، به ویژه غضروفی، avascular و شامل جمعیت کم عمق از chondrocytes در یک ماتریس سلول اضافی (ECM) غنی از نوع کلاژن II، یکgrecan، و Proogteogtogtogtogtogtogtogtogtogtogtogtogtzy است که نه تنها در برابر هضم مواد مغذی عمده، بلکه به طور مشابه، بلکه باعث می شود.

استراتژی های مدیریت موفق سلول و فرهنگ

آنزیم های آنزیمی

سنگ بنای انزوای سلول ها از بافت های متصل فشرده هضم آنزیمی است. کلاژناز (نوع I، II یا یک مخلوط) به طور گسترده ای مورد استفاده قرار می گیرد زیرا فیبروز های کلاژن بومی را کاهش می دهد، دفع غلظت سلول های آلوده شده با هضم، یک هضم منبع بیش از حد، اغلب عملکرد بهتری دارد: اول، درمان مختصر با تریپتین یا پرواز برای حذف غلظت آنزیم طولانی مدت (0.1)

کاهش بافت برای استخوان

قبل از هضم آنزیمی، بافت استخوان باید به نرم کردن ماتریس معدنی، دو روش اولیه، عوامل جوش (به عنوان مثال، EDTA) و اسید (به عنوان مثال، هیدروکلریک یا اسید تنفسی) را کاهش دهد، EDTA در pH خنثی برای مطالعات نیاز به بقای سلول بالا است زیرا یون های کلسیم را بدون پروتئین های سلول های معمولی کاهش می دهد (که اغلب با کاهش مقدار هورمون های اسید مایع).

اختلال مکانیکی و Microdissection

برای بیوپسی های بسیار کوچک یا هنگامی که هضم آنزیمی غیر عملی است، روش های مکانیکی می تواند مورد استفاده قرار گیرد. میکروdissection تحت یک میکروسکوپ استریو اجازه می دهد تا انزوا دقیق از تراشیدن غضروف یا تراشه های استخوان ترلیک، به حداقل رساندن آلودگی از بافت های اطراف، به ویژه استخراج قابل توجه از سلول های مکانیکی، باعث ایجاد اسکلت کوچک می شود که می تواند به طور مستقیم به غذاهای فرهنگی (اگر چه فرهنگ غیر طبیعی باعث کاهش آلودگی سلول های فیبروخته شده است) شود، اما در ابتدا می تواند از سلول های قابل توجهی از سلول های رشد قابل توجهی از 7، جدا شود.

استفاده از عوامل رشد و سیگنال های مولیول

هنگامی که جدا شد، chondrocytes و osteoblasts نیاز به مکمل عامل رشد خاص برای تکثیر و حفظ ترکیب پروتئین های enotype خود را. استخوان Morphogenetic (BMP-2، BMP-7) و تبدیل مقدار اسید μx 1 (TGF، به ویژه TGF1 و TGF ⁇ 3) برای ترویج chdroon و trophy رشد اولیه (Iblefoc) ضروری است.

بهینه سازی رسانه های فرهنگی و مکمل ها

انتخاب متوسط فرهنگ سلول به طور مستقیم بر رفتار سلول تأثیر می گذارد. برای chondrocytes، اسیدهای آمینه بی حد بالا، Dulbecco توصیه شده در Eagle Medium (DMEM) با کاهش مواد معدنی کلسیم در طول تجزیه و تحلیل اولیه اسید آمینه، مکمل می باشد و HEPES شاخص دلبستگی جانبی بسیار حساس است.

سیستم های فرهنگ 3D و Scaffolds

فرهنگ تک لایه دو بعدی می تواند باعث تمایز chondrote (از دست دادن کلاژن II و بیان agrecan) و صاف کردن osteoblast. سیستم های سه بعدی بهتر تقلید از میکروارگانیسم بومی است فرهنگ پلت فرم (کلوم سلول های ساختاری)، فرهنگ های میکرو و encapulation (aga، alrose، فشرده سازی، یا سنتز اسید ضدعفونی کننده) که اغلب برای تقویت لایه های ضروری استفاده می شود.

کنترل کیفیت و ویژگی های سلول های جدا شده

پس از انزوا و فرهنگ، ضروری است که هویت سلولی و خلوص را تأیید کند.برای chondrocytes، نشانگرهای مثبت شامل کلاژن نوع II، agrecan، SOX9 و عملکرد ماتریسی غضروف (COMP) نشانگرهای Osteobel شامل Runx2، osterix، فسفاتات قلیایی و osteocalcency، غلظت p.

قرص های معمول و عیب یابی

چندین مسئله اغلب زمانی رخ می دهد که سلول های معدنی از غضروف و استخوان (FLT:0) عملکرد سلول های کم (FLT:1) را می توان با گسترش زمان هضم (با محدودیت های ایمن)، با استفاده از آنزیم های تازه یا ترکیب دقیق از روش های تجزیه و تحلیل چند منظوره (FLT:2Bacterial) یا آلودگی قارچی [F3] شناسایی خطرات دائمی است؛ به خصوص هنگامی که پردازش سیگنال های آنزیمی با نمونه های آنزیم های آنزیمی کامل (p6x)

مسیر های آینده و تکنولوژی های نوظهور

پیشرفت های اخیر مرزهای آنچه را که می توان با جمعیت سلول های کمیاب از بافت های اسکلتی به دست آورد، توالی RNA سلول های منفرد نشان می دهد ناهمگنی غیرمنتظره در میان دودکش ها و پوکیوسیت ها، امکان غلبه بر استراتژی های فرهنگ هدفمند بیشتر در هفته های تکثیر ژنوئیدی و میکروپلماتی که انواع سلول های مختلف سلول ها را ادغام می کنند (chondrocytes، osturoblast، سلول های مطالعه ای که اجازه می دهند تا ابزارهای دقیق تر شوند).

نتیجه گیری

سلول های هدایت کننده موفق از غضروف و استخوان نیاز به یک رویکرد چند وجهی دارند که به زیست شناسی منحصر به فرد این بافت ها احترام می گذارد.انتخاب دقیق پروتکل های هضم آنزیمی، روش های کاهش تنش، کوکتل عامل رشد و سیستم عامل های فرهنگ اسکلتی ما به طور چشمگیری بهبود عملکرد سلول و ثبات دقیق را تضمین می کند که سلول های مورد استفاده در برنامه های کاربردی و استراتژی های مطالعه کاربردی هستند.

برای پروتکل های دقیق هضم آنزیمی، پروتکل های طبیعت (FLT:0) را ببینید Collection]؛ برای دستورالعمل های عامل رشد، به Cells Translational Medicine مراجعه کنید؛ و برای تکنیک های کاهش تنش، مشورت کنید Pubmed. [F5:3)