軟骨と骨細胞培養の課題を理解する

軟骨および骨組織は、独自の構造および生化学的特性による第一次細胞培養における最も有限な障害の一部を提示します。 軟骨、特に動脈硬化症は、血管的であり、密閉細胞内マトリックス(ECM)に埋め込まれたコンドレータ細胞のスペーサの人口は、免疫および前立腺肥大症に影響を及ぼすだけでなく、細胞の増殖や、細胞の増殖、および細胞の増殖、および細胞の増殖、および細胞の増殖、および細胞の増殖、および細胞の増殖、および細胞の減少、および細胞の増殖不能の減少、および細胞の減少、および細胞の減少、および細胞の減少、および細胞の減少、および細胞の減少、および細胞の減少、および細胞の減少、および細胞の減少、および細胞の減少、および細胞の減少、および細胞の減少、および細胞の減少、および細胞の減少、および細胞の減少、および細胞の減少、および細胞の減少、および細胞の減少、および細胞の減少、および細胞の減少、および細胞の細胞の減少、および細胞の細胞の減少、および細胞の減少、および細胞の細胞の

細胞の隔離と文化の成功のための戦略

酵素消化器

密な結合組織からの細胞分離の角質は酵素消化です。コラーゲン酵素(タイプI、II、またはブレンド)は、ネイティブコラーゲンのフィブロールを分解し、刻印された細胞を解放するので最も広く使用される酵素です。軟骨のために、二段の消化はしばしばより良い生存性をもたらす:まず、表面をプロテオガンを除去する簡単な治療は、脂肪分解または消化管を抑制する(0〜1000°C)。

骨のためのティッシュのDeclcification

酵素消化の前に、骨組織はミネラルマトリックスを柔らかくするために非分化されなければなりません。 2つの主なアプローチは、細胞タンパク質を傷つけないため、キレート剤(例えば、EDTA)と酸(例えば、塩素または過熱酸)です。 中立pHのEDTAは、細胞タンパク質を傷つけないため、高細胞生存性を必要とする研究に好まれています。 一般的に、MTAは、細胞の細胞の分解を検査する場合には、その細胞の細胞の細胞の活性化を促進します。 細胞の細胞の細胞の細胞の細胞の分解は、細胞の細胞の細胞の分解がより少なく、細胞の細胞の分解が、より速く、細胞の細胞の細胞の細胞の細胞の分解が、より少なく、細胞の細胞の細胞の細胞の細胞の細胞の分解が、より速く、より少なく、または細胞の細胞の細胞の細胞の細胞の分解が、より少なく、または細胞の細胞の細胞の細胞の細胞の細胞の細胞の細胞の細胞の細胞の分解を検査が、より少なく、より少なく、より少なく、より速く、または細胞の細胞の細胞の細胞の細胞の細胞の細胞の細胞の分解

機械的分裂とマイクロ分裂

非常に小さなバイオピースや酵素消化が実用的であるとき、機械的方法が使用できる。 ステレオマイクロスコープの下にあるマイクロディスセクションでは、軟骨のシェービングや骨のチップの正確な分離を可能にし、周囲の組織からの汚染を最小限に抑えます。 皮切りと下水層の縮小は、培養物(植物文化)に直接配置することができる小さな分解物を作成します。 この収穫は、初期の細胞が少ないが、特に切開細胞から切開されると、切開細胞が714日後には、有意な切開口部に増殖することができます。

成長因子と分子のシグナル伝達の使用

分離された、chondrocytes および osteoblasts は、特定の成長因子の補習を増殖し、phenotype を維持する必要があります。Bone Morphogenetic Protein (BMP-2、BMP-7) および 変形成長因子(TGF‐β、特に TGF‐β1 および TGFβ3)は、コンドロンジシスおよび骨粗しょう症を促進するために必要です。 線維芽細胞成長因子は、通常、β-β-β-β-β-β-β-β-β-β-β-β-10% および TGFβ-10% ) が増加します。

文化メディアとサプリメントの最適化

細胞培養中の選択は、細胞の動作に直接影響します。 chondrocytes では、グルタマックス、非必須アミノ酸、および HEPES バッファが一般的である場合に補う、高-グルコースの Dulbecco の変性イーグルミディアム(DMEM)。 血漿濃度およびバッチの一貫性は重要です。 一部のラボでは、赤みがかった葉酸を低下させる(抗原薬)が、抗原薬を減少させる必要があります。 抗原薬は、抗原薬が再発症に抗原薬を添加する場合には、抗原薬を減少させる必要があります。

3Dカルチャーシステムと足場

モノラルレイヤーの文化は、コンドレータ細胞の分裂(コラーゲンIIとアグリカン式の損失)とオステブロスフラットテンショニングを引き起こす可能性があります。三次元システムが、ネイティブマイクロ環境を模倣するのが良い。ペレット文化(遠心分離機)、マイクロマス文化、ハイドロゲルカプセル化(アガローズ、アルギン、コラーゲン、またはヒアルロン酸)は、骨格の増殖や、骨格の増殖、および骨格の増殖、および骨格の増殖、および骨格の増殖のための構造体構造体構造体構造体、および骨の増殖器、および骨の増殖器を促進します。

分離された細胞の品質管理そして特徴化

分離および文化の後で、それは細胞の同一性および純度を確かめるのに不可欠です。コンドラーサイトのために、肯定的なマーカーはコラーゲンのタイプII、アグレカン、SOX9および軟骨のオリゴマー性マトリックス蛋白質(COMP)を含んでいます。OsteoblastのマーカーはRunx2、オステリクス、アルカリリンカチナーゼおよびオステオカルシンを含んでいます。流れのcytometry、量的PCRおよび免疫の蛍光は、細菌の沈殿物が各々の腐食性として低下するべきであることを示します。

一般的な落札とトラブルシューティング

軟骨および骨から細胞を培養するときに、いくつかの問題が頻繁に発生します。 []] ]は、消化時間を延長することによって対処することができます(安全な限界で)、新鮮な酵素を使用して、または酵素および分解方法を組み合わせたものです。 細菌の詳細な汚染は、特に、消化管管法で硬化性物質を低下させる場合には、通常、またはビタミンBを減少させる可能性があります。 [FLTF]は、または、細胞の細胞の細胞の細胞の変形を切除菌する場合には、または細胞の細胞の変形を抑制します。 [FLTF]

未来の方向と新興技術

最近の進歩は、骨格組織からスカルス細胞の人口と達成することができるものの境界を押しています。 単一セルRNAシーケンシングは、コンドラーム細胞と骨細胞の間の予期しない異質性を明らかにし、よりターゲットを絞った培養戦略を可能にします。 オルガノイドおよびマイクロティッシュモデルは、複数の細胞タイプ(コンドラーサイト、骨粗鬆症、エンドテル)を統合し、遺伝子細胞の細胞を分解し、遺伝子細胞の細胞の細胞を修復する遺伝子の細胞を修復するなどの遺伝子を研究することができます。

コンテンツ

軟骨および骨から細胞を巧みに培養することは、これらの組織のユニークな生物学を尊重する多面的なアプローチを必要とします。酵素消化プロトコル、減衰方法、成長因子カクテル、および文化プラットフォームの厳選は、細胞の収量と表現力を向上させることができます。 厳格な品質管理は、下流アプリケーションで使用される細胞が本物で機能的であることを保証します。 これらの戦略を採用することにより、研究者は、細胞の再生をさらに高めることができます。 LTF - 遺伝子検査、および遺伝子検査、および遺伝子検査、および遺伝子検査、および細胞の細胞の細胞の細胞の再生、および細胞の細胞の細胞の再生を促進します。 [F]

酵素消化に関する詳細なプロトコルについては、 ] を参照してください。自然プロトコル のコレクション; 成長因子ガイドラインについては、[ 幹細胞翻訳薬を参照してください。そして、増量技術については、]]] を参照してください。PubMed-インデックスメソッド。